【摘 要】
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目的 观察应用组蛋白脱乙酰酶抑制剂丙戊酸钠调节染色体组蛋白低乙酰化水平对肝癌细胞增殖的作用,并进一步检测Cyclin A、Cyclin D1、Cychn E、P21 Waf/cip1蛋白及mRNA表达变
【机 构】
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山东省千佛山医院普外中心实验室,山东省千佛山医院检验科
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目的 观察应用组蛋白脱乙酰酶抑制剂丙戊酸钠调节染色体组蛋白低乙酰化水平对肝癌细胞增殖的作用,并进一步检测Cyclin A、Cyclin D1、Cychn E、P21 Waf/cip1蛋白及mRNA表达变化,探讨其分子作用机制.方法 应用0.75～4.0 mmol/L丙戊酸钠作用于肝癌细胞系HepG2细胞后,MTT法检测细胞生长抑制、细胞克隆形成试验观察克隆形成率、碘化丙啶标记流式细胞术检测细胞周期、间接免疫荧光法分析Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E、P21Waf/cip1蛋白表达,RT-PCR检测分析Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E、P21Waf/cip1mRNA表达.结果 0.75～4.0 mmol/L丙戊酸钠作用24、48、72、96 h,观察组出现了时间-剂量依赖趋势的生长抑制,同时细胞克隆形成率显著降低,对照组细胞增殖周期G1、S、M期所占比例未见明显改变,而观察组则随药物浓度、作用时间的不同而出现不同程度的细胞增殖周期G1期阻滞.Gl期比例由55.4%～82.8%不等,差异有统计学意义(P＜0.01).观察组Cyclin A、Cyclin D1蛋白及mRNA表达均被明显下调而LP21Waf/cip1蛋白、mRNA表达则被明显上调,与对照组比较差异均有统计学意义(均P＜0.01);而CyclinE蛋白和mRNA表达变化则未见明显差异(P＞0.05).结论 通过应用特异性组蛋白脱乙酰酶抑制剂调节组蛋白乙酰化修饰可明显抑制肝癌细胞生长、抑制细胞克隆形成、阻滞细胞增殖周期于G1期;丙戊酸钠作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂可明显抑制肝癌细胞增殖,其作用机制是通过上调P21Waf/cip1 mRNA蛋白表达,下调Cyclin D1、Cyclin A mRNA蛋白表达分别和/或协同实现.
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