探讨低氧对髓核细胞微环境中酸敏感离子通道3(ASIC3)的影响及其机制的研究。
方法原代分离髓核细胞，利用苏木精-伊红(HE)和甲苯胺蓝进行鉴定，苏木精-伊红(HE)、甲苯胺蓝和实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)摸索合适的低氧浓度，细胞凋亡和FQ-PCR摸索合适作用时间，构建干扰和过表达ASIC3载体，FQ-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)验证其效率。实验分组为：正常组(Control)；低氧处理组(2%O2)；干扰空载组＋低氧处理组(shRNA-NC＋2%O2)；ASIC3干扰载体组＋低氧处理组(shRNA-ASIC3＋2%O2)；表达空载＋低氧处理(Vector＋2%O2)；ASIC3表达＋低氧处理组(ASIC3＋2%O2)。利用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测其增殖情况，流式检测其细胞周期和细胞凋亡，透射电镜检测各组自噬小体的形成，免疫荧光检测缺氧诱导因子(HIF)-1α和ASIC3表达，FQ-PCR和Western blot检测HIF-1α、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)及磷酸化的表达。应用SPSS 19.0统计软件分析，符合正态分布的定量资料多组间比较采用单因素方差分析，定性资料采用χ2，相关性分析采用Spearman相关分析。
结果成功分离髓核细胞，合适的低氧作用浓度为2%，合适的作用时间为48 h，干扰和过表达载体构建成功并都具有效果。与对照组比较，低氧组和ASIC3表达＋低氧处理细胞增殖受到抑制，细胞凋亡升高，细胞周期阻止在G1期，钙离子浓度升高，HIF-1α、p-ERK1/2和p-MAPK表达升高，差异有统计学意义(t＝2.671，P<0.05)。
结论干扰ASIC3能够抑制MAPK信号的激活从而改善低氧髓核细胞微环境，这可能是改善椎间盘源性腰痛机制之一。