目的建立检测糖类抗原（CA）199的磁珠时间分辨荧光免疫分析法（Nano-TRFIA）。方法采用磁珠耦联标记抗CA199单克隆抗体（B1）,Eu³⁺标记抗CA199单克隆抗体(Eu³⁺-CA199-B7),采用双抗体夹心法建立基于磁性微球法的CA199检测方法 Nano-TRFIA,并对90份血清标本进行该方法血清学检测。结果 Nano-TRFIA检测CA199的灵敏度为0.2U/mL,甲胎蛋白、CA125对CA199-TRFIA均无交叉反应。磁珠耦联B1 4℃保存3个月免疫反应基本无损;同批试剂连续3个月应用分析结果稳定,样品的平均添加回收率为97.91%,批内和批间变异系数（CV）分别为4.84%和8.32%。Nano-TRFIA检测血清CA199结果与电化学发光法（ECLIA）检测结果显著相关（Y=0.969 8 X+4.015 3）。以ECLIA为金标准,Nano-TRFIA检测血清CA199时2份标本出现了假阳性。结论 Nano-TRFIA的灵敏度、特异度、准确度等均符合临床应用要求,为进一步临床验证奠定了基础。