环氧化酶2特异性siRNA真核表达质粒的构建与鉴定

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目的构建环氧化酶2(COX-2)特异性小干扰RNA(siRNA)真核表达质粒,研究其对人结肠癌细胞COX-2的阻抑作用。方法设计短发夹结构的COX-2siRNA对应模版DNA序列,退火处理后克隆至pGPH1-GFP-Neo质粒,构建重组质粒pGPH1-GFP-Neo-COX-2。将重组质粒转染人结肠癌HT-29细胞,采用RT-PCR、Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测COX-2表达。结果酶切及测序证实质粒pGPH1-GFPLNe伊COX-2构建成功。转染重组质粒72h后可以显著抑制HT-
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