【摘 要】
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[目的]探究C/EBPα在诱导鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2成骨过程中的调节机制.[方法]体外构建成骨分化模型,在RNA水平和蛋白质水平检测C3H10T1/2细胞成骨分化时转录因子PPARγ
【机 构】
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山东省泰安市妇幼保健院 271000
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[目的]探究C/EBPα在诱导鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2成骨过程中的调节机制.[方法]体外构建成骨分化模型,在RNA水平和蛋白质水平检测C3H10T1/2细胞成骨分化时转录因子PPARγ(过氧化物酶体增殖物激活受体,peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)的mRNA和蛋白质的表达情况;通过构建干扰转录因子PPARγ表达的siRNA腺病毒载体和PPARγ转录因子的拮抗剂G3335,研究PPARγ对于CCAAT启动子结合蛋白(C/EBPα)表达的作用;染色质免疫共沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay,CHIP)分析PPARγ2位于C/EBPα启动子-1286bp/-1065bp区域内的结合位点,并检测PPARγ表达情况对C/EBPα启动子-1286bp/-1065bp区段DNA甲基化和组蛋白去乙酰化的影响.[结果]C3H10T1/2细胞成骨分化过程中,PPARγ通过结合C/EBPα启动子-1286bp/-1065bp区段激活/促进该基因表达.在成骨作用终末阶段/后期观察到C/EBPα启动子-1286bp/-1065bp区段的DNA发生超甲基化,从而阻抑了PPARγ与之结合,与PPARγ相关的HDAC1抑制得以解除,从而下调了-1286bp/-1065bp区段的组蛋白乙酰化.[结论]本研究通过阐述C/EBPα对PPARγ的增强调控作用,揭示间充质干细胞成骨分化的深层次分子机制;同时通过探讨DNA甲基化和组蛋白去乙酰化通过PPARγ联系的机制,从而为调控间充质干细胞分化提供分子理论模型.
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