【摘 要】
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根据GenBank中已知的植物细胞壁转化酶基因的保守区序列设计一对PCR引物,分别以滤纸(吸附有甜橙基因组噬菌体文库LB平板的噬茵体)和Top agarose(滤纸吸附后的LB平板)的SM洗脱
【机 构】
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浙江大学华家池校区园艺系,浙江大学华家池校区园艺系
【基金项目】
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国家自然科学基金重点项目(批准号:39730340,30170648)资助
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根据GenBank中已知的植物细胞壁转化酶基因的保守区序列设计一对PCR引物,分别以滤纸(吸附有甜橙基因组噬菌体文库LB平板的噬茵体)和Top agarose(滤纸吸附后的LB平板)的SM洗脱液为模板,仅通过7次PCR就快速、准确、经济地筛选出CSCWI阳性克隆.提取该阳性克隆的DNA并进行BamH I和HindⅢ双酶切,通过PCR方法鉴定阳性酶切条带并回收,利用TaqDNA聚合酶的聚合活性和3'末端转移酶活性,改变该片段使其含有3'腺苷酸(A)突出末端,与pUCm-T载体实现了高效连接.
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