【摘 要】
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根据脱氧核糖核酸与Gelred结合形成的荧光络合物在紫外灯照射下发出荧光的原理,建立一种更适用实际应用的快速、简单高通量的非特异性核酸酶酶活测定方法.采用脱氧核糖核酸为底物,利用凝胶成像仪测定底物减少引起光密度的变化值,从而计算出非特异性核酸酶活力.研究了影响酶活测定的关键因素,并对该方法的线性、准确度、精密度、检测限与定量限进行了验证.结果表明,方法最佳反应时间为3 min,待测酶活线性范围在4.17～9.01 U/μL,线性关系、精密度、准确度和灵敏度均符合方法学开发评估要求.相较于紫外吸收法,此方法
【机 构】
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成都大学 四川抗菌素工业研究所,成都 610052
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根据脱氧核糖核酸与Gelred结合形成的荧光络合物在紫外灯照射下发出荧光的原理,建立一种更适用实际应用的快速、简单高通量的非特异性核酸酶酶活测定方法.采用脱氧核糖核酸为底物,利用凝胶成像仪测定底物减少引起光密度的变化值,从而计算出非特异性核酸酶活力.研究了影响酶活测定的关键因素,并对该方法的线性、准确度、精密度、检测限与定量限进行了验证.结果表明,方法最佳反应时间为3 min,待测酶活线性范围在4.17～9.01 U/μL,线性关系、精密度、准确度和灵敏度均符合方法学开发评估要求.相较于紫外吸收法,此方法检测限更低,反应时间更短,且能用于多个样品的分析.
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