【摘 要】
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应用Tet-On基因表达系统,调控血小板生成素(TPO)基因在NIH/3T3细胞中的表达时间与水平.籍脂质体介导的基因转移方法,pTet-On质粒转染NIH/3T3细胞株,得到稳定细胞株NIH/3T3-Te
【机 构】
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北京医科大学人民医院血液病研究所,1)北京医科大学生物化学与分子生物学系
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应用Tet-On基因表达系统,调控血小板生成素(TPO)基因在NIH/3T3细胞中的表达时间与水平.籍脂质体介导的基因转移方法,pTet-On质粒转染NIH/3T3细胞株,得到稳定细胞株NIH/3T3-Tet-On.pTRE/TPO与pTK-Hyg质粒共转染NIH/3T3-Tet-On细胞株,得到双稳定细胞株NIH/3T3-Tet-On-TPO.在培养基中加入或不加强力霉素,RT-PCR、Western印迹及EUSA法检测培养上清TPO表达.结果表明,当培养基中不加强力霉素时,TPO无明显表达(0.1μg/L);当培养基中加入2 mg/L强力霉素时,TPO表达明显增高(10.8μg/L).TPO表达水平与强力霉素浓度有关,随强力霉素浓度增高,TPO表达增加.TPO表达水平还与强力霉素作用时间有关,加入强力霉素6 h后,TPO表达明显增加(1.2μg/L),随培养时间延长,TPO表达增加,24 h达到峰值(10.8μg/L),而且这种诱导作用是可逆的.为进一步进行TPO基因表达调控的体内研究奠定基础,有望为TPO基因治疗提供一条可控的安全途径.
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