【摘 要】
：
目的 构建含有人沉默调节蛋白6(hSIRT6)基因的重组原核表达载体,获得高效表达hSIRT6蛋白的基因工程菌,以及较高产量的SIRT6蛋白.方法 取205 ng HEK293细胞总RNA逆转录后合成
【机 构】
：
华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科,华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科,华中科技大学同济医学院解剖学系
论文部分内容阅读
目的 构建含有人沉默调节蛋白6(hSIRT6)基因的重组原核表达载体,获得高效表达hSIRT6蛋白的基因工程菌,以及较高产量的SIRT6蛋白.方法 取205 ng HEK293细胞总RNA逆转录后合成的cDNA为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增hSIRT6的编码序列,并克隆至原核表达载体pGEX-4T-3中,构建重组的质粒pGEX-4T-3/SIRT6;将重组质粒pGEX-4T-3/SIRT6转化感受态细菌BL21( DE3),在含100 mg/L氨苄西林的LB平板37℃培养过夜,以pGEX-4T-3空载体作为对照,在相同条件下转化并异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶(GST)蛋白.产物经SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定.结果 PCR产物大小及双酶切鉴定证明所克隆的基因是hSIRT6,DNA测序进一步证实与GeneBank序列完全一致.获得高表达及纯化的SIRT6-GST融合蛋白,该可溶蛋白的相对分子质量为72×103,经Western blot鉴定证实为目的蛋白.结论 成功构建了基因重组体pGEX-4T-3/hSIRT6,并制备出可溶性SIRT6-GST融合蛋白.
其他文献
目的 了解江苏省“十一五”期间职业病发病现状,分析疾病谱特征、地区和行业分布特点和发病趋势.方法 汇总2006至2010年职业病信息网络报告和职业病报告卡数据,以确诊职业病
目的 观察贫血对机械通气患者预后的影响.方法 采用前瞻性研究方法,收集入住重症监护病房(ICU)预计机械通气时间≥72 h,血红蛋白(Hb)浓度≥100 g/L的患者.根据患者机械通气
目的 观察BTBD10基因在大鼠胰岛β细胞株INS-1细胞过表达后对其增生的影响和可能机制.方法 构建重组真核表达质粒pcDNA4.0-BTBD10,利用脂质体转染INS-1细胞,转染后48 h筛选获
炼钢发往各轧钢的铸坯存在一定量的剔废坯，对炼钢成本和效益造成极大影响。文章通过讨论加强工序产品质量过程控制管理等方法，来提高铸坯质量。
随着人们生活水平的提高,人们用电的需求也不断的增加,这种情况下,相关部门要做好用电检查工作,以更好的了解用户的需求和市场现状,实现更加优质的电力供应。
With the impr
目的 探讨首发抑郁症患者的细胞因子水平变化及度洛西汀对其的影响.方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测38例抑郁症患者度洛西汀治疗前、后血清白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介
胃肠动力紊乱性疾病的观察和研究在儿科仍属初级阶段,小肠平滑肌毒蕈碱样胆碱能受体平衡的变化、L型钙离子通道活力改变及Cajal间质细胞网络和数量的改变在小肠平滑肌功能紊
IT服务管理(ITSM)是一套方法论,它的作用在于帮助企业对IT系统的规划、研发、实施和运营进行有效管理。ITIL(基础架构库)是实现ITSM的一种方式,而ITIL的核心内容是流程。合理
与玻璃体视网膜手术技术相关的新技术、新方法、新设备、新观念不断涌现,提高了对玻璃体视网膜疾病的认识,促进了玻璃体视网膜手术治疗理念的创新.重视玻璃体视网膜手术中的
目的 观察中心静脉血和动脉血血气的二氧化碳分压差(△PCO2)联合上腔静脉氧饱和度( ScvO2)能否更好的指导休克复苏治疗.方法 研究入选93例感染性休克、大手术后严重感染及全