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目的
构建表达分泌型肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因的腺病毒载体,观察TRAIL基因对前列腺癌细胞株PC-3增殖的影响。
方法采用基因合成的方法获得含有分泌型信号肽的TRAIL基因,连接入GV315载体,在293A细胞中进行重组腺病毒的包装及扩增。以构建好的腺病毒载体感染体外培养的前列腺癌细胞株PC-3。采用间接免疫荧光法检测腺病毒感染后PC-3细胞中TRAIL表达的变化。Western blot检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和Caspase-8表达的变化,通过平板克隆实验、细胞生长实验检测TRAIL对PC-3细胞增殖能力的影响。
结果成功构建重组分泌型腺病毒载体Ad-sTRAIL。PC-3细胞经Ad-sTRAIL感染后TRAIL蛋白表达水平明显增加,并且active-Caspase-3和active-Caspase-8的表达明显增加。平板克隆实验结果显示Ad-sTRAIL组克隆形成率[(30.60±2.10)%]明显低于Control组[(46.60±4.86)%,q=7.56,P<0.01]及Ad-LacZ组[(45.90±3.56)%,q=7.19,P<0.01]。噻唑蓝(MTT)实验结果显示Ad-sTRAIL对PC-3细胞的抑制作用自48 h后(20.15%)差异有统计学意义(q=6.82,P<0.01)。
结论通过重组分泌型TRAIL腺病毒载体Ad-sTRAIL使PC-3细胞表达TRAIL基因,并可增加active-Caspase-3和active-Caspase-8的表达,从而抑制前列腺癌细胞的增殖。