新生儿疾病筛查血片微量DNA提取方法的建立及其在甲基化检测中的应用

来源 :中华实用儿科临床杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:flyingfish521
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目的

建立新生儿疾病筛查血片DNA提取的方法,探索其在甲基化检测中的应用。

方法

依据性别随机将新生儿出生时的血片样本20例分为2组:传统法组(10例)、改良试剂盒法组(10例)。从DNA浓度、完整性和是否适应于聚合酶链反应(PCR)研究,对抽提的DNA质量进行评估。进一步对DNA做重亚硫酸盐处理,采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测瘦素(Leptin)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因启动子区域甲基化水平变化。

结果

改良试剂盒法抽提的DNA浓度为(5.70±0.81)mg/L,显著优于传统法[(3.50±0.45) mg/L](t=2.79,P<0.05);生化分析仪分析显示DNA片段完整性更好。琼脂糖凝胶电泳显示可以扩增出有效的18S基因PCR片段,说明抽提的DNA可以用于PCR相关实验研究;MSP结果显示不同血片样本甲基化LeptinTNF-α基因启动子区域甲基化模式不同。

结论

改良试剂盒方法可以简便有效地从干血片中提取DNA,而且抽提的DNA可以较好地用于基因甲基化研究;为从DNA甲基化的角度揭示疾病的发生,提供了新的研究方案和技术方法。

其他文献
目的回顾分析1例戊二酸血症Ⅰ型家系临床资料特点,并探讨其戊二酰辅酶A脱氢酶(GCDH)基因突变类型。方法收集家系中发病患儿临床资料,包括体格检查,头颅CT、MRI,尿液有机酸分析,血液肉碱串联质谱分析结果。抽取先证者及其家系成员(2代共5人)外周血,提取基因组DNA。PCR扩增GCDH基因11个外显子及其侧翼区序列,扩增产物纯化后直接测序。结果先证者头围正常,无外貌畸形,格拉斯哥指数(GCS)评分