污染土壤中主要石油降解基因AlkB和Nah定量检测方法的建立和应用

来源 :分析化学 | 被引量 : 0次 | 上传用户：laverke

【摘要】

：

建立了SYBR Green I实时荧光定量聚合酶链式反应（Real Time-qPCR）检测油田污染土壤中烷烃降解基因AlkB和萘降解基因Nah的方法。比对相关降解石油菌株的GenBank序列,设计合成针

【作者】

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刘庆龙唐景春万晓彤

【机构】

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南开大学环境科学与工程学院、环境污染过程与基准教育部重点实验室、天津市城市生态环境修复与污染防治重点实验室

【出处】

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分析化学

【发表日期】

：

2014年9期

【关键词】

：

石油烃降解基因荧光聚合酶链式反应 SYBR Green I 烷烃降解基因萘降解基因 Hydrocarbon degrading genes Fluores

【基金项目】

：

国家自然科学基金项目（No.31270544）, 博士点基金项目（博导类）（No.20120031110015）, 863重大项目（No.2013AA06A205）, 天津市自然科学基金项目（No.10JCYBJC05600）资助

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建立了SYBR Green I实时荧光定量聚合酶链式反应（Real Time-qPCR）检测油田污染土壤中烷烃降解基因AlkB和萘降解基因Nah的方法。比对相关降解石油菌株的GenBank序列,设计合成针对烷烃和萘降解基因扩增引物AlkBf/AlkBr和Nahf/Nahr。将纯化的常规PCR胶回收产物与pEASY-T1载体连接,转化到感受态细胞培养。提取并梯度稀释阳性克隆质粒,构建Real Time-qPCR标准测定曲线。25μL扩增体系最佳反应条件：前后引物终浓度为0.2μmol/L,12.5μL 2&

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