【摘 要】
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目的观察恒河猴轮状病毒(RRV)对BALB/c小鼠肝脏内调节性T(Treg)细胞的抑制作用是否与Treg细胞叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)基因启动子CpG岛甲基化有关,探讨其在小鼠肝脏自身免疫炎症中的作用。方法60只7~ 9周龄BALB/c小鼠随机分为3组(每组20只)腹腔注射空斑形成单位(PFU)= 106 RRV感染24 h和48 h,正常对照组腹腔注射相同容积生理盐水, Perco
【机 构】
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430022武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院小儿外科,430022武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院小儿外科,430022武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院小儿外科,430022武
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目的观察恒河猴轮状病毒(RRV)对BALB/c小鼠肝脏内调节性T(Treg)细胞的抑制作用是否与Treg细胞叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)基因启动子CpG岛甲基化有关,探讨其在小鼠肝脏自身免疫炎症中的作用。
方法60只7~ 9周龄BALB/c小鼠随机分为3组(每组20只)腹腔注射空斑形成单位(PFU)= 106 RRV感染24 h和48 h,正常对照组腹腔注射相同容积生理盐水, Percoll非连续梯度分离单核细胞,利用流式细胞仪分选小鼠肝脏CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞。应用重亚硫酸盐修饰后测序法(BSP)检测BALB/c小鼠脾脏组织中分选出的Treg细胞DNA Foxp3基因启动子CpG岛甲基化状态,Western blot检测Foxp3蛋白的表达。
结果Treg细胞在正常对照组和RRV 24、48 h占CD4+细胞比例分别为(5. 26±0. 21)%、(4. 30±0. 46)%、(3. 60±0. 19)%,RRV 24、48 h的比例与正常对照组细胞比例差异有统计学意义(P< 0. 05);对照组和RRV组24、48 hCpG岛甲基化程度分别为(2. 78±0. 33)%、(26. 70±1. 87)%、(41. 18±3. 67)%,各时间点甲基化率均较正常组明显升高(P<0. 01),Treg细胞Foxp3蛋白表达也明显下降,与RRV感染的时间呈正相关,差异均有统计学意义(P<0. 05)。
结论RRV可以明显促进BALB/c小鼠肝脏中Treg细胞Foxp3基因启动子CpG岛甲基化抑制Treg细胞的增殖和正常的免疫功能,这一过程可能参与了小鼠自身免疫性肝炎的发生。
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