【摘 要】
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为研究环鸟苷酸-腺苷酸合成酶入核的机制,利用兔外周血B细胞筛选抗人cGAS蛋白单克隆抗体.针对已三次免疫人cGAS(161-522)蛋白的新西兰兔,运用流式细胞术得到阳性效应B细胞,在
【机 构】
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福建师范大学南方生物医学研究中心,福建师范大学生命科学学院
【基金项目】
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福建省自然科学基金资助项目(2017J01621);福建省中青年教师教育科研项目(JA15130)
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为研究环鸟苷酸-腺苷酸合成酶入核的机制,利用兔外周血B细胞筛选抗人cGAS蛋白单克隆抗体.针对已三次免疫人cGAS(161-522)蛋白的新西兰兔,运用流式细胞术得到阳性效应B细胞,在单管里对单细胞裂解,得到总RNA,逆转录生成cDNA,两步巢式PCR扩增同一个B细胞来源的抗体重链和轻链可变区序列,抗体基因扩增成功率高达80%以上.293T重组表达兔抗人cGAS蛋白单克隆抗体并鉴定,获得1个具有较好结合特异性的兔抗人cGAS蛋白单克隆抗体,ELISA检测结果显示抗体的效价达1∶10 000.
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