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目的
制备抗氯离子通道蛋白(chloride channel 7,CLC-7)多克隆抗体。
方法将表达载体pEGFP-CLC-7导入感受态大肠杆菌DH-5α,利用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导细菌表达CLC-7蛋白;经SDS-PAGE电泳后切胶获得纯化的CLC-7蛋白,与免疫佐剂乳化后免疫新西兰大白兔,免疫5次后,经心脏采血获取抗血清,用Western blot检测抗血清特异性及效价。
结果与市售的CLC-7抗体比较,所获抗CLC-7抗血清可识别细菌及HeLa细胞表达的CLC-7蛋白,表明抗血清有较好的特异性;1∶4000倍稀释抗血清时,Western blot实验仍可获得清晰的反应带,表明所制备的抗CLC-7多克隆抗体有较高的效价。
结论利用原核表达的CLC-7蛋白作为抗原免疫动物,获得了高效价且特异性好的抗人CLC-7蛋白多克隆抗体,该抗体可用于后续研究。