【摘 要】
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目的建立快速荧光灶试验(fluorescencefocusassay，FFA)滴定乙型脑炎病毒(Japaneseencephalitisvirus,JEV)的方法，验证该法替代病毒蚀斑法测定乙型脑炎减毒活疫苗(简称乙脑减毒活疫苗)滴度的可行性并将该法作初步应用。方法利用原核表达方式构建JEV非结构蛋白1(non-structuralprotein1，NS1)重组体系，以纯化所得的JEV-NS1蛋白免疫家兔制备抗NS1蛋白多克隆抗体，建立快速FFA测定JEV滴度的方法。通过与病毒蚀斑法作比对分析，对其专属性
【机 构】
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武汉生物制品研究所有限责任公司轮状病毒疫苗室，武汉 430207武汉生物制品研究所有限责任公司轮状病毒疫苗室，武汉 430207武汉生物制品研究所有限责任公司轮状病毒疫苗室，武汉 430207武汉生物
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目的建立快速荧光灶试验(fluorescence focus assay，FFA)滴定乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)的方法，验证该法替代病毒蚀斑法测定乙型脑炎减毒活疫苗(简称乙脑减毒活疫苗)滴度的可行性并将该法作初步应用。
方法利用原核表达方式构建JEV非结构蛋白1(non-structural protein 1，NS1)重组体系，以纯化所得的JEV-NS1蛋白免疫家兔制备抗NS1蛋白多克隆抗体，建立快速FFA测定JEV滴度的方法。通过与病毒蚀斑法作比对分析，对其专属性、准确度、精密度、线性、范围和耐用性进行验证。用经验证后的FFA检测28批乙脑减毒活疫苗，分析其应用于生产的可行性。
结果所制备的多克隆抗体与JEV可产生特异性荧光灶反应，与其他病毒(森林脑炎病毒、黄热病毒、人柯萨奇病毒A2型和A4型)无交叉反应；FFA方法学验证结果均符合乙脑减毒活疫苗的质控要求；与蚀斑法比较，FFA检测结果更趋一致。
结论本研究建立的FFA通过方法学验证，可应用于乙脑减毒活疫苗成品的滴度测定。
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