目的 检测胰腺组织ppENK基因甲基化状态,探讨ppENK基因甲基化在胰腺癌发生发展过程中的作用.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测胰腺癌组织、胰腺癌细胞株、正常胰腺组织中ppENK基因甲基化状态,分析其与临床病理特征的关系.RT-PCR法检测组织及细胞ppENKmRNA表达.应用去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理胰腺癌细胞株(PANC1、AsPC1),采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期,蛋白质印迹法检测DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)蛋白表达.结果 正常胰腺组织表达ppENK mRNA,基因非甲基化.胰腺癌组织ppENK基因甲基化率为90.3％ (28/31),ppENK基因甲基化与临床病理特征无相关性.SW1990、PANC1、PC3、AsPC1、PuPan-1胰腺癌细胞株均无ppENK mRNA表达,基因均表现为甲基化,ppENK mRNA表达与其甲基化呈负相关.5-Aza-dC处理后,PANC1、AsPC1细胞的ppENK基因被去甲基化,ppENK mRNA恢复表达；细胞的增殖呈浓度依赖性被抑制；细胞凋亡率增加[(31.57±6.76)％比(3.21±1.43)％,P=0.002,( 16.6±8.22)％比(3.82±1.71)％,P=0.058]；DNMT3a表达减少；PANC1的G1期细胞比例显著增加[(67.87±2.72)％比(54.57±7.18)％,P=0.040],S期细胞比例显著减少[(22.37±4.31)％比(33.73±4.63)％,P=0.036],AsPC1的G1期、S期细胞比例无明显变化(P =0.236、0.075).结论 ppENK基因甲基化是引起ppENK表达抑制的重要分子事件.ppENK基因去甲基化后可抑制胰腺癌细胞增殖,促进凋亡,细胞周期被阻滞在G1期,DNMT3a蛋白表达减少。
抑癌基因ppENK甲基化在胰腺癌发病机制中的作用
【摘 要】
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目的 检测胰腺组织ppENK基因甲基化状态,探讨ppENK基因甲基化在胰腺癌发生发展过程中的作用.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测胰腺癌组织、胰腺癌细胞株、正常胰腺组织中ppENK基因甲基化状态,分析其与临床病理特征的关系.RT-PCR法检测组织及细胞ppENKmRNA表达.应用去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理胰腺癌细胞株(PANC1、AsPC1),采用四甲
【机 构】
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100020北京,首都医科大学附属北京朝阳医院消化科,中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院消化科,中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院消化科,100020北京,首都医科大学附属北京朝阳医院
【出 处】
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中华胰腺病杂志
【发表日期】
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2012年12期
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