【摘 要】
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目的探讨血清应答因子(SRF)对肝癌细胞系Bel-7402和SMMC-7721增殖与迁移能力的影响及其作用机制。方法在Bel-7402和SMMC-7721中瞬时转染SRF重组质粒过表达SRF;通过慢病毒包装
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(91440206)
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目的探讨血清应答因子(SRF)对肝癌细胞系Bel-7402和SMMC-7721增殖与迁移能力的影响及其作用机制。方法在Bel-7402和SMMC-7721中瞬时转染SRF重组质粒过表达SRF;通过慢病毒包装将特异敲低SRF的短发夹RNA(shRNA)重组质粒转染Bel-7402和SMMC-7721细胞系,筛选稳定敲低SRF的细胞系;蛋白质免疫印迹(WB)法检测细胞中SRF蛋白的表达水平,验证SRF的过表达或敲低效果; CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测SRF对肝癌细胞系增殖能力的影响; Transwell法检测SRF对肝癌细胞系迁移能力的影响;实时定量PCR法检测受SRF调控的下游靶基因的mRNA表达水平;采用Log-rank检验比较SRF高表达组和低表达组肝癌患者的生存期差异。结果过表达或敲低SRF对肝癌细胞的增殖能力无明显影响;过表达SRF可显著促进Bel-7402和SMMC-7721的迁移能力,而敲低SRF则显著抑制其迁移能力;过表达SRF可显著促进肝癌细胞上皮间充质转化(EMT)过程,而敲低SRF则显著抑制其EMT过程;临床相关性分析显示,SRF在肝癌组织中上调表达,且与肝癌患者的不良预后显著相关。结论 SRF可通过促进细胞EMT而增加肝癌细胞的迁移能力,从而发挥促癌基因的功能。
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