探讨抑制钙敏感受体(CaSR)表达对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠心肌H9c2细胞肥大的影响及作用机制。

采用细胞培养的方法，用AngⅡ处理H9c2细胞复制心肌肥大细胞模型，并在此基础上，应用CaSR激动剂三氯化钆(GdCl₃)、CaSR抑制剂Calhex231或自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理细胞。共分为5组：对照组、AngⅡ组、GdCl₃ + AngⅡ组、GdCl₃ + Calhex231 + AngⅡ组、GdCl₃ + 3-MA+ AngⅡ组，每组6例。采用考马斯亮蓝蛋白试剂盒测定总蛋白含量；蛋白印迹法检测心肌肥大信号蛋白Ca²⁺/钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaMKⅡ)与其磷酸化形式(pCaMKⅡ)表达来评价细胞肥大情况；蛋白印迹法检测CaSR、自噬标志物[Beclin-1、微管相关蛋白轻链(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ、P62]和Ca²⁺/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶β(CaMKK_β)-腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路的表达。

①GdCl₃能够促进AngⅡ所诱发的CaSR蛋白表达增多(对照组：0.22±0.04; AngⅡ组：0.43±0.02; GdCl₃+ AngⅡ组：0.63±0.08，P均< 0.05)、细胞总蛋白含量增多[对照组：(2.52±0.84) g/L；AngⅡ组：(8.72±3.60) g/L; GdCl₃+ AngⅡ组：(14.17±4.49)g/L，P均< 0.05]、pCaMKⅡ/CaMKⅡ比值升高(对照组：0.25±0.05；AngⅡ组：0.51±0.03；GdCl₃ + AngⅡ组：0.77±0.06，P均< 0.05)，而Calhex231则能够抑制GdCl₃引起的上述指标的增加[GdCl₃ + Calhex231 + AngⅡ组，CaSR：0.41±0.16；总蛋白含量：(9.92±2.54) g/L；pCaMKⅡ/CaMKⅡ：0.58±0.08，P均< 0.05]。②GdCl₃能够促进AngⅡ所诱发的自噬标志物Beclin-1蛋白表达增多(对照组：0.31±0.06; AngⅡ组：0.55±0.09; GdCl₃+ AngⅡ组：0.74±0.08，P均< 0.05)、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值增加(对照组：0.28±0.06; AngⅡ组：0.56±0.10 ；GdCl₃ + AngⅡ组：1.00±0.15，P均< 0.05)，P62蛋白表达减少(对照组：0.54±0.03；AngⅡ组：0.34±0.02; GdCl₃+ AngⅡ组：0.15±0.03，P均< 0.05)；Calhex231则能抑制GdCl₃引起的自噬标志物指标的改变(GdCl₃ + Calhex231 + Ang Ⅱ组，Beclin-1：0.53±0.14 ；LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ：0.57±0.12；P62：0.28±0.05，P均< 0.05)。③GdCl₃可引起pCaMKK_β/CaMKK_β(对照组：0.43±0.09；AngⅡ组：0.76±0.12; GdCl₃+ AngⅡ组：1.19±0.21)和pAMPK/AMPK(对照组：0.38±0.11; AngⅡ组：0.68±0.08；GdCl₃ + AngⅡ组：1.18±0.08，P均< 0.05)比值升高，pmTOR/mTOR(对照组：0.90±0.10; AngⅡ组：0.54±0.04; GdCl₃+ AngⅡ组：0.29±0.09，P均< 0.05)比值降低；Calhex231则能抑制GdCl₃引起的上述蛋白表达变化(GdCl₃ + Calhex231 + AngⅡ组，pCaMKK_β/CaMKK_β：0.75±0.06 ；pAMPK/AMPK ：0.57±0.05；pmTOR/mTOR ：0.51±0.08，P均< 0.05)。

抑制CaSR表达可逆转AngⅡ诱导的H9c2细胞肥大，其机制可能与抑制自噬、抑制CaMKK_β-AMPK-mTOR通路有关。