【摘 要】
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目的建立一种体外无血清培养扩增脐血间充质干细胞(MSC)的方法。方法从脐血中分离制备单个核细胞悬液,分别接种于有血清培养基及自制的无血清培养基中,比较两种培养条件下细
【机 构】
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解放军第94医院神经内科,江西医学院第二附属医院血液科
【基金项目】
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江西省自然科学基金资助项目(0540084)
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目的建立一种体外无血清培养扩增脐血间充质干细胞(MSC)的方法。方法从脐血中分离制备单个核细胞悬液,分别接种于有血清培养基及自制的无血清培养基中,比较两种培养条件下细胞生长情况,并进行瑞氏、过碘酸雪夫(PAS)、非特异性酯酶(NAE)和碱性磷酸酶(ALP)染色观察,流式细胞仪分析两种培养条件下MSC表面CD分子表达情况及细胞周期。结果有血清培养第3天出现较多贴壁细胞,8天有细胞丛生长,12～18天细胞融合成片,呈典型的成纤维细胞样外观。无血清培养第5天出现较多贴壁细胞,8天有细胞丛生长,14～20天细胞融合成片。单层融合的脐血MSC消化传代培养1周左右达融合,可继续传代扩增。最终有血清培养获得(3.45±0.28)×108个细胞,无血清培养获得(2.97±0.26)×108个细胞,两者比较差异显著(P<0.05)。无血清与有血清培养21天,贴壁细胞PAS和ALP染色阳性,以成纤维细胞、巨噬细胞、内皮细胞为主。流式细胞仪检测显示,两种培养条件下扩增后的脐血MSC均不表达CD34、CD13和CD45,而强表达CD166、CD29、CD105,较强表达CD54;无血清培养组G0/G1期细胞比例明显高于有血清培养组(P<0.05)。结论利用自行研制的无血清培养基添加一些辅助因子能较好地培养扩增间充质干细胞。
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