农杆菌介导pepA基因对黑曲霉菌丝体的遗传转化

来源 :东北农业大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：sunleilong

【摘要】

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通过重叠延伸PCR将宇佐米曲霉中1347bp的酸性蛋白酶基因pepa与黑曲霉糖化酶基因5＇同源臂和3＋同源臂进行拼接，构建pepA基因表达框。将此表达框插入载体pSZH中，构建黑曲霉同源重组

【作者】

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李杰李硕然张谷楠汪天虹钟耀华赵宁

【机构】

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东北农业大学生命科学学院,山东大学生命科学学院

【出处】

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东北农业大学学报

【发表日期】

：

2013年5期

【关键词】

：

酸性蛋白酶黑曲霉重叠延伸PCR ATMT Acidic protease Aspergillus niger Overlap extension PCR

【基金项目】

：

山东大学微生物技术国家重点实验室开放项目（M2008-17）

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通过重叠延伸PCR将宇佐米曲霉中1347bp的酸性蛋白酶基因pepa与黑曲霉糖化酶基因5＇同源臂和3＋同源臂进行拼接，构建pepA基因表达框。将此表达框插入载体pSZH中，构建黑曲霉同源重组表达载体pSZH—pepA。将载体pSZH—pepA通过冻融法转化农杆菌AGLl，进而通过农杆菌介导法转化高产糖化酶的黑曲霉菌丝体。以PDA作为共培养培养基，乙酰丁香酮（简称As）浓度200μmol·mL-1的条件下，28℃恒温静置培养48h，经潮霉素筛选和PCR鉴定获得3株重组菌株。以出发菌株作为对照，对3

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