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摘要：目的：比较三种检测方法在金黄色葡萄球菌中的应用价值。方法：通过完成三种检测方法的选择性鉴定实验、敏感性实验及食品中检测应用来比较三种检测方法的各项检测指标。结果：金黄色葡萄球菌在3种检测方法的培养基中均有生长且菌落特征明显，三种金黄色葡萄球菌检测方法中Baird- Parker+RPF法敏感性最高，PetrifilmTM测试法次之，Baird- Parker法最低。三种金黄色葡萄球菌检测方法在检测生鲜乳中，Baird- Parker+RPF法检出率最高，PetrifilmTM测试法次之，Baird-Parker法最低，三组之间率的比较差异具有统计学意义；两两比较结果显示，Baird-Parker+RPF法检出率高于Baird-Parker法，差异具有统计学意义（P<0.0167）。三种金黄色葡萄球菌检测方法中Baird-Parker+RPF法和PetrifilmTM测试法的各项检测指标均优于Baird- Parker法。结论：Baird-Parker+RPF法和PetrifilmTM测试法的敏感性、在食品检测中的检出率、操作简便性、检测时间均优于Baird- Parker法，更适合作为基层检测部门的现场检测方法。
关键词：Baird-Parker法；Baird-Parker+RPF法；PetrifilmTM法；金黄色葡萄球菌；应用价值
随着我国经济的发展和报道的透明化，越来越多的有关食品安全的问题被曝光，国内的食品安全问题受到社会广泛的关注。而食品安全问题主要集中表现为食物中毒，一般引发食物中毒的原因主要是微生物性食物中毒，在我国的细菌性食物中毒事件中，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒约占四分之一，故如何快速、简便、有效地检测出食品中的金黄色葡萄球菌，具有重要的现实意义[1]。本文主要对Baird-Parker 平板涂布法和PetrifilmTM 测试纸片法以及Baird-Parker+RPF平板倾注法检测金葡菌进行比较，旨在探求一种适应微生物实验室要求的食品快速检测方法，有效改善食品安全问题。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 试剂与培养基
平板计数琼脂、营养肉汤、BHI肉汤、Baird- Parker培养基、卵黄亚碲酸钾增菌剂均购于北京陆桥技术有限责任公司；PetrifilmTM金黄色葡萄球菌快速检验测试片购于美国3M公司；Baird-Parker+RPF（兔血浆）购于梅里埃公司。
1.1.2 实验菌株
金黄色葡萄菌，阪崎肠杆菌购于北京陆桥有限责任公司，大肠杆菌，蜡样芽孢杆菌，伤寒杆菌来自本实验室保存的菌种。
1.1.3 样品
分批次采集临桂区农贸市场、超市食品100份，其中生肉类25份，熟肉制品21份，水产品15份，生鲜乳20份，冷食菜19份。
1.2 检测方法[2-3]
1.2.1 选择性鉴定实验
将5株实验菌过夜培养的肉汤培养物以生理盐水作10倍系列稀释，选择合适菌浓度分别涂布Baird-Parker平板和Baird-Parker+RPF平板，取1ml接种PetrifilmTM测试片，使最终菌液在各培养基浓度约100～1000cfu/ml，36℃培养24～48h，观察各菌株的典型生长情况。
1.2.2 敏感性实验
取标准金葡菌菌株实验菌液以生理盐水作10倍系列稀释，选择各稀释度菌液，Baird- Parker法、纸片法分别按BG/T4789.37-2008中第一法和第三法接种，Baird-Parker+RPF法按生产商使用说明用平板倾注法接种，同时以平板计数琼脂倾注法计算含菌量作对照。
1.2.3 食品中检测应用
同一检测样品以无菌生理盐水作10倍系列稀释后，选择适当稀释度分别按3种检测方法接种，Baird-Parker法、纸片法分别按BG/T4789.37-2008中第一法和第三法接种，Baird-Parker+RPF法按生产商使用说明用平板倾注法接种，直接计数样品中金黄色葡萄球菌cfu/g （ml）。
1.3 统计学方法
数据的分析采用SPSS18.0统计软件，计数资料的率的组间比较采用检验或Fisher确切概率法，以P<0.05为差异具有统计学意义；三组间计数资料率的两两比较采用Bonferroni法调整检验水准，以P<0.0167为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 3种金黄色葡萄球菌检测方法选择性鉴定实验结果比较
如表1所示，金黄色葡萄球菌在3种检测方法的培养基中均有生长且菌落特征明显，蜡样芽孢杆菌在3种检测方法的培养基中也均有生长，但菌落特征不明显，阪崎肠杆菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌均未在3种检测方法的培养基中有生长。详见表1。
3 讨论
金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属的一种，在自然界中无处不在，其对营养条件要求不高，且对外界环境抵抗能力较强，故食品受到金黄色葡萄球菌污染的机会大幅度升高[4]。特别是在食品在生产销售的过程中，由于其加工前自身带菌，或加工过程中被污染，包装密封不严格，生产或销售人员带菌以及在运输过程中都有可能受到该菌的污染。研究表明金黄色葡萄球菌可以产生多种毒素和侵袭性酶，人类一旦误食被金黄色葡萄球菌污染且数量超过卫生标准的食物，极易发生食物中毒，引起食品安全问题[5]。目前我国普遍使用的金黄色葡萄球菌检测方法为微生物培养鉴别法、酶联免疫反应法以及PCR、实时PCR法，每种检测方法都有其各自的利弊，目前尚无法在特异性与灵敏性间达到平衡。故如何建立一种低成本、高效能的检测方法，可以快速、准确的检测食品中的致病菌，并且能够适合基层检测部门的现场实施，从而为食品检测部门及食品企业提供技术支持及安全保障已成为关注的焦点和研究的热点。 本文通过检测实验分析3种金黄色葡萄球菌检测方法选择性鉴定实验发现，Baird- Parker法、Baird-Parker+RPF法及PetrifilmTM法3种检测方法对金黄色葡萄球菌的选择性良好。3种金黄色葡萄球菌检测方法中Baird-Parker+RPF法敏感性最高，PetrifilmTM测试法次之，Baird- Parker法最低。
将3种金黄色葡萄球菌检测方法应用至食品检测中，发现Baird-Parker+RPF法的在生肉类、熟肉制品、水产品、冷食菜的检测中，检出率高于PetrifilmTM测试法和Baird-Parker法。而在检测生鲜乳中，Baird-Parker+RPF法检出率最高，PetrifilmTM测试法次之，Baird- Parker法最低。
通过观察3种金黄色葡萄球菌检测方法各项检测指标可知，Baird-Parker+RPF法和PetrifilmTM测试法的各项检测指标均优于Baird- Parker法。原因在于，Baird- Parker法需在接种后48h观察平板，并挑取可疑菌落转种到BHI肉汤中， 再经18～ 24 h 培养后做血浆凝固酶试验进行证实，操作步骤繁多，工作量增加，检测周期也相应增长[6]，而Baird- Parker+RPF法和PetrifilmTM测试法使用的是预先培养基，可省去大量的实验准备工作，工作量大大减少，Baird-Parker+RPF法无需再做证实工作，而PetrifilmTM测试法仅需对可疑菌落加确认反应片进行证实即可，操作简便，检测周期大为缩短。但由于Baird-Parker+RPF法和PetrifilmTM测试法使用的材料均为进口产品，其价格相对较高，检测成本也相应增高，高于Baird- Parker法[7]。
综上所述，Baird- Parker法、Baird- Parker+RPF法和PetrifilmTM测试法对金黄色葡萄球菌均具有较好的选择性，但Baird- Parker+RPF法和PetrifilmTM测试法的敏感性、在食品检测中的检出率、操作简便性、检测时间均优于Baird- Parker法，更适合作为基层检测部门的现场检测方法。
参考文献：
[1]万婧，周向阳，胡兴娟，等.金黄色葡萄球菌的检测方法优化及其在舟山市水产品加工厂中的污染状况调查[J].生物技术进展，2011，01（5）：357-361.
[2]中华人民共和国卫生部.GB4789.10-2010食品安全国家标准.食品微生物学检验.金黄色葡萄球菌检验[S].北京：中国标准出版社，2010.
[3]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局. SN/T 1895-2007食品中金黄色葡萄球菌的快速计数法.PetrifilmTM 测试片法[S].北京：中国标准出版社，2007.
[4]唐洁，王远亮.常德市餐饮食品金黄色葡萄球菌检测结果分析[J].食品安全质量检测学报，2014，5（11）：4177-4181.
[5]刘海卿，佘之蕴，陈丹玲，等.金黄色葡萄球菌三种定量检验方法的比较[J].食品研究与开发，2014，（13）：113-114，115.
[6]张倩华.应用两种培养基检测食品中金黄色葡萄球菌的比较[J].国际检验医学杂志，2014，（21）：2960-2961，2962.
[7]梁景涛，谢翊，林秋芬，等.3种食品中金黄色葡萄球菌检测方法的比较研究[J].中国卫生检验杂志，2010，20（4）：790-791.
关键词：Baird-Parker法；Baird-Parker+RPF法；PetrifilmTM法；金黄色葡萄球菌；应用价值
随着我国经济的发展和报道的透明化，越来越多的有关食品安全的问题被曝光，国内的食品安全问题受到社会广泛的关注。而食品安全问题主要集中表现为食物中毒，一般引发食物中毒的原因主要是微生物性食物中毒，在我国的细菌性食物中毒事件中，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒约占四分之一，故如何快速、简便、有效地检测出食品中的金黄色葡萄球菌，具有重要的现实意义[1]。本文主要对Baird-Parker 平板涂布法和PetrifilmTM 测试纸片法以及Baird-Parker+RPF平板倾注法检测金葡菌进行比较，旨在探求一种适应微生物实验室要求的食品快速检测方法，有效改善食品安全问题。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 试剂与培养基
平板计数琼脂、营养肉汤、BHI肉汤、Baird- Parker培养基、卵黄亚碲酸钾增菌剂均购于北京陆桥技术有限责任公司；PetrifilmTM金黄色葡萄球菌快速检验测试片购于美国3M公司；Baird-Parker+RPF（兔血浆）购于梅里埃公司。
1.1.2 实验菌株
金黄色葡萄菌，阪崎肠杆菌购于北京陆桥有限责任公司，大肠杆菌，蜡样芽孢杆菌，伤寒杆菌来自本实验室保存的菌种。
1.1.3 样品
分批次采集临桂区农贸市场、超市食品100份，其中生肉类25份，熟肉制品21份，水产品15份，生鲜乳20份，冷食菜19份。
1.2 检测方法[2-3]
1.2.1 选择性鉴定实验
将5株实验菌过夜培养的肉汤培养物以生理盐水作10倍系列稀释，选择合适菌浓度分别涂布Baird-Parker平板和Baird-Parker+RPF平板，取1ml接种PetrifilmTM测试片，使最终菌液在各培养基浓度约100～1000cfu/ml，36℃培养24～48h，观察各菌株的典型生长情况。
1.2.2 敏感性实验
取标准金葡菌菌株实验菌液以生理盐水作10倍系列稀释，选择各稀释度菌液，Baird- Parker法、纸片法分别按BG/T4789.37-2008中第一法和第三法接种，Baird-Parker+RPF法按生产商使用说明用平板倾注法接种，同时以平板计数琼脂倾注法计算含菌量作对照。
1.2.3 食品中检测应用
同一检测样品以无菌生理盐水作10倍系列稀释后，选择适当稀释度分别按3种检测方法接种，Baird-Parker法、纸片法分别按BG/T4789.37-2008中第一法和第三法接种，Baird-Parker+RPF法按生产商使用说明用平板倾注法接种，直接计数样品中金黄色葡萄球菌cfu/g （ml）。
1.3 统计学方法
数据的分析采用SPSS18.0统计软件，计数资料的率的组间比较采用检验或Fisher确切概率法，以P<0.05为差异具有统计学意义；三组间计数资料率的两两比较采用Bonferroni法调整检验水准，以P<0.0167为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 3种金黄色葡萄球菌检测方法选择性鉴定实验结果比较
如表1所示，金黄色葡萄球菌在3种检测方法的培养基中均有生长且菌落特征明显，蜡样芽孢杆菌在3种检测方法的培养基中也均有生长，但菌落特征不明显，阪崎肠杆菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌均未在3种检测方法的培养基中有生长。详见表1。
3 讨论
金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属的一种，在自然界中无处不在，其对营养条件要求不高，且对外界环境抵抗能力较强，故食品受到金黄色葡萄球菌污染的机会大幅度升高[4]。特别是在食品在生产销售的过程中，由于其加工前自身带菌，或加工过程中被污染，包装密封不严格，生产或销售人员带菌以及在运输过程中都有可能受到该菌的污染。研究表明金黄色葡萄球菌可以产生多种毒素和侵袭性酶，人类一旦误食被金黄色葡萄球菌污染且数量超过卫生标准的食物，极易发生食物中毒，引起食品安全问题[5]。目前我国普遍使用的金黄色葡萄球菌检测方法为微生物培养鉴别法、酶联免疫反应法以及PCR、实时PCR法，每种检测方法都有其各自的利弊，目前尚无法在特异性与灵敏性间达到平衡。故如何建立一种低成本、高效能的检测方法，可以快速、准确的检测食品中的致病菌，并且能够适合基层检测部门的现场实施，从而为食品检测部门及食品企业提供技术支持及安全保障已成为关注的焦点和研究的热点。 本文通过检测实验分析3种金黄色葡萄球菌检测方法选择性鉴定实验发现，Baird- Parker法、Baird-Parker+RPF法及PetrifilmTM法3种检测方法对金黄色葡萄球菌的选择性良好。3种金黄色葡萄球菌检测方法中Baird-Parker+RPF法敏感性最高，PetrifilmTM测试法次之，Baird- Parker法最低。
将3种金黄色葡萄球菌检测方法应用至食品检测中，发现Baird-Parker+RPF法的在生肉类、熟肉制品、水产品、冷食菜的检测中，检出率高于PetrifilmTM测试法和Baird-Parker法。而在检测生鲜乳中，Baird-Parker+RPF法检出率最高，PetrifilmTM测试法次之，Baird- Parker法最低。
通过观察3种金黄色葡萄球菌检测方法各项检测指标可知，Baird-Parker+RPF法和PetrifilmTM测试法的各项检测指标均优于Baird- Parker法。原因在于，Baird- Parker法需在接种后48h观察平板，并挑取可疑菌落转种到BHI肉汤中， 再经18～ 24 h 培养后做血浆凝固酶试验进行证实，操作步骤繁多，工作量增加，检测周期也相应增长[6]，而Baird- Parker+RPF法和PetrifilmTM测试法使用的是预先培养基，可省去大量的实验准备工作，工作量大大减少，Baird-Parker+RPF法无需再做证实工作，而PetrifilmTM测试法仅需对可疑菌落加确认反应片进行证实即可，操作简便，检测周期大为缩短。但由于Baird-Parker+RPF法和PetrifilmTM测试法使用的材料均为进口产品，其价格相对较高，检测成本也相应增高，高于Baird- Parker法[7]。
综上所述，Baird- Parker法、Baird- Parker+RPF法和PetrifilmTM测试法对金黄色葡萄球菌均具有较好的选择性，但Baird- Parker+RPF法和PetrifilmTM测试法的敏感性、在食品检测中的检出率、操作简便性、检测时间均优于Baird- Parker法，更适合作为基层检测部门的现场检测方法。
参考文献：
[1]万婧，周向阳，胡兴娟，等.金黄色葡萄球菌的检测方法优化及其在舟山市水产品加工厂中的污染状况调查[J].生物技术进展，2011，01（5）：357-361.
[2]中华人民共和国卫生部.GB4789.10-2010食品安全国家标准.食品微生物学检验.金黄色葡萄球菌检验[S].北京：中国标准出版社，2010.
[3]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局. SN/T 1895-2007食品中金黄色葡萄球菌的快速计数法.PetrifilmTM 测试片法[S].北京：中国标准出版社，2007.
[4]唐洁，王远亮.常德市餐饮食品金黄色葡萄球菌检测结果分析[J].食品安全质量检测学报，2014，5（11）：4177-4181.
[5]刘海卿，佘之蕴，陈丹玲，等.金黄色葡萄球菌三种定量检验方法的比较[J].食品研究与开发，2014，（13）：113-114，115.
[6]张倩华.应用两种培养基检测食品中金黄色葡萄球菌的比较[J].国际检验医学杂志，2014，（21）：2960-2961，2962.
[7]梁景涛，谢翊，林秋芬，等.3种食品中金黄色葡萄球菌检测方法的比较研究[J].中国卫生检验杂志，2010，20（4）：790-791.