【摘 要】
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目的：原核表达牛种布鲁氏菌VirB12蛋白,并检测其免疫原性。方法：提取细菌基因组DNA,根据GenBank中的VirB 12序列设计引物,利用PCR方法扩增出VirB 12基因,并克隆到pMD18-T simple载体上,测序,再亚克隆至pET-30a(+)载体上,转化到大肠杆菌BL21 (DE3)中,用IPTG诱导,表达产物经组氨酸结合树脂柱纯化,并对纯化后的表达产物进行免疫印迹免疫印迹鉴定。
【机 构】
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辽宁医学院畜牧兽医学院,锦州121001 吉林大学动物医学学院,长春130062
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会
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目的：原核表达牛种布鲁氏菌VirB12蛋白,并检测其免疫原性。方法：提取细菌基因组DNA,根据GenBank中的VirB 12序列设计引物,利用PCR方法扩增出VirB 12基因,并克隆到pMD18-T simple载体上,测序,再亚克隆至pET-30a(+)载体上,转化到大肠杆菌BL21 (DE3)中,用IPTG诱导,表达产物经组氨酸结合树脂柱纯化,并对纯化后的表达产物进行免疫印迹免疫印迹鉴定。结果：重组质粒经Nde I与Sal I酶切后,可见5422和519bp的片段,与预期值相符。转化至BL21 (DE3)后,37 ℃诱导4h,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,表达出带有多聚组氨酸标签的融合蛋白VirB12,纯化后的蛋白纯度达94％,经免疫印迹法分析,目的蛋白具有抗原特异性。结论：成功表达了布鲁氏菌VirB 12蛋白,纯化蛋白具有抗原特异性。
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