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目的：检测C-fos基因启动子在胶质瘤细胞株中的转录活性;构建c-fos启动子调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)自杀基因重组腺病毒载体,观察腺病毒介导的HSV-tk/GCV系统在cfos启动子调控下对胶质瘤细胞的杀伤作用.
方法：PCR法克隆人C-fos,TERT,Survivin,E2F1,Cox2基因启动子片段,将上述5种启动子以及CMV启动子序列分别插入到pGL4-Basic报告载体中.将构建的pGL4-Cfos,pGL4-TERT,pGL4-Survivin,pGL4-E2F1,pGL4-Cox2,pGL4-CMV重组质粒和内参质粒pRL-TK瞬时共转染胶质瘤细胞系U87,U373,U251，检测双荧光素酶的活性。
结果：经酶切鉴定和测序验证，克隆及载体构建完全正确。将腺病毒Ad-CMV-TK一IRES-hrGFP和Ad-CFOS-TK-IRES-hrGFP分别感染U251细胞，随GCV质量浓度的增加，U251细胞的抑制率升高，在MOI=100, GCV质量浓度分别为1,10,100,1000μmol/1条件下，细胞抑制率分别为(24.18±6.0l)％, （30.39±9.67)%,（57.07±9.29)%, (94.50±3.48)。将腺病毒Ad-CMV-TK-IRES-hrGFP和Ad-CFOS-TK-IRES-hrGFP分别感染U87细胞，随GCV质量浓度的增加，U87细胞的抑制率升高，在MOI=100, GCV质量浓度分别为1,10,100,1000μmol/1条件下，细胞抑制率分别为(36.03±2.27)%,(96.62±1.86)%,(98.09±1.49 %, (98.84±0.60)。
结论:在人胶质瘤细胞株中C-fos启动了的转录活性高。腺病毒介导的HSV-tk/GCV系统在c-fos启动了调控下在体外可以有效杀伤胶质瘤细胞。该结果可为胶质瘤的靶向性基因治疗研究提供参考。