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目的:优化检测轮状病毒滴度的荧光灶试验(fluorescence focus assays,FFA)步骤和技术参数。
方法:以NIH提供的参考资料为基础,通过残留血清、病毒吸附量、甲基纤维素以及离心和Ca2+等对病毒滴度影响的因素进行试验。运用SPSS11.5软件进行统计分析,并对所建立的FFA法进行了3次重复性试验分析,以验证优化后FFA试验的稳定性。
结果: 选用病毒吸附前不洗涤细胞单层、采用100μl/孔病毒吸附量、不加甲基纤维素覆盖、病毒感染后离心、抗体结合反应液采用PBST-Ca2+等优化条件应用于FFA试验。
结论: 优化后的FFA试验具有操作简便、结果稳定、重复性好等优点。