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为建立方便快捷的猪附红细胞体血清学检测方法,本研究应用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体和兔抗猪附红细胞体多克隆抗体.然后以纯化的抗猪附红细胞体单克隆抗体为捕获抗体,纯化的兔抗猪附红细胞体多克隆抗体为检测抗体；应用方阵试验前后确定检测抗体和酶标二抗的最佳反应浓度,以及捕获抗体和标准抗原的最佳反应浓度；对酶标二抗、封闭液和底物显色液(OPD)的最佳工作时间进行优化；对30份猪附红细胞体阴性样本进行双抗体夹心ELISA检测,确定双抗体夹心ELISA方法的临界值；进行特异性试验、敏感性试验、批内重复性试验、批间重复性试验和临床应用试验,从而建立猪附红细胞体双抗体夹心ELISA检测方法.结果显示,所建立的猪附红细胞体双抗体夹心ELISA检测方法的最佳工作条件为：抗猪附红细胞体单克隆抗体的包被浓度为5.42 mg/L,兔抗猪附红细胞体多克隆抗体浓度和酶标抗体的稀释倍数分别为6.84 mg/L和1：2000.确定酶标二抗工作时间为在37℃条件下作用1h,以5％脱脂乳做封闭液的最佳作用时间为37℃条件下2h,底物显色液(OPD)的最佳工作时间为室温下避光显色15 min.判定标准为：当检测样品OD492nm值＞0.290为阳性,OD492nm值＜0.259为阴性,OD492值在这两者之间的为可疑.该ELISA方法对弓形虫、猪链球菌、猪肺炎支原体和猪繁殖与呼吸综合症病毒等均无交叉反应；敏感度可达3.25 mg/L；其重复性变异系数均小于10％.采用建立的ELISA方法与血涂片染色镜检方法同时检测68份临床样品,双抗体夹心ELISA检测的阳性率为29.4％,比血涂片染色镜检方法检测的阳性率高10.3％.本研究建立的猪附红细胞体双抗体夹心ELISA检测方法具有敏感性高、特异性好、成本低及方便快捷等优点,可以用于猪附红细胞体的快速检测.