【摘 要】
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目的 观察氯化锂对血管性认知功能障碍小鼠学习记忆能力和海马组织自噬相关蛋白表达变化的影响.方法 采用雄性C57BL/6小鼠反复脑缺血再灌注的方法,建立VCI小鼠模型.实验1：将小鼠随机分为假手术组和手术组,手术组按照术后不同时间点分为1d、3d、7d、14d、28d5个亚组.采用Western blot方法观察VCI发病过程中p-mTOR、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)蛋白水平
【机 构】
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050051石家庄,河北省人民医院神经内三科
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目的 观察氯化锂对血管性认知功能障碍小鼠学习记忆能力和海马组织自噬相关蛋白表达变化的影响.方法 采用雄性C57BL/6小鼠反复脑缺血再灌注的方法,建立VCI小鼠模型.实验1：将小鼠随机分为假手术组和手术组,手术组按照术后不同时间点分为1d、3d、7d、14d、28d5个亚组.采用Western blot方法观察VCI发病过程中p-mTOR、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)蛋白水平的动态变化.实验2：将小鼠随机分为假手术组、VCI模型组、氯化锂预防组(术前连续腹腔注射2mmol/kg氯化锂7d)及氯化锂治疗组(术后连续腹腔注射2 mmol/kg氯化锂14d).术后14d进行行为学测试观察各组小鼠学习、记忆能力,尼氏染色观察各组小鼠海马CA1区病理学变化及透射电镜观察海马CA1区超微结构变化,应用western blot观察各组小鼠海马p-mTOR、Beclin1、LC3B蛋白表达变化.结果 (1)模型组小鼠的学习、记忆成绩明显劣于假手术组小鼠(P＜0.01),氯化锂预防组小鼠学习、记忆能力和治疗组小鼠学习能力较模型组显著改善(P＜0.01),氯化锂治疗组记忆成绩较模型组虽有好转,但无统计学意义(P＞0.05).(2)尼氏染色观察,VCI模型组小鼠可见CA1区神经元部分缺失,且排列疏松,神经元形态不规则,胞体、胞核固缩.给予氯化锂干预后,上述情况得到明显改善.(3)透射电镜观察,VCI模型组海马CA1区神经元胞膜不规则,有不同程度的水肿,细胞器数量明显减少,线粒体变少、严重者有空泡化现象,粗面内质网脱颗粒,细胞核固缩,染色质分布不均匀.经氯化锂干预后,海马CA1区神经元超微结构得到明显改善.(4)反复脑缺血再灌注损伤后小鼠海马自噬相关蛋白p-mTOR、Beclin1、LC3B表达较假手术组明显增高(P＜0.01),于14 d达到高峰.经氯化锂干预后,pmTOR蛋白表达水平明显升高,Beclin1和LC3B蛋白表达较VCI模型组明显降低,与VCI模型组相比均具有统计学差异(P＜0.01).结论 海马自噬相关蛋白的表达变化参与了VCI的发生,氯化锂改善小鼠学习、记忆能力可能与其上调p-mTOR,下调Beclin1、LC3B蛋白表达有关.
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