【摘 要】
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本研究的目的是建立猪内源性反转录病毒(porcine endogenousretrovirus，PERV)在基因组中整合拷贝数的检测方法。设计并合成了检测PERV pol基因的引物，采用基于SYBR Green I的实时荧光定量PcR方法，检测小型猪基因组DNA中多聚酶基因(pol)的拷贝数，估算出单细胞基因组中PERV整合的拷贝数，从而建立起PERV整合拷贝数的检测方法，并对该方法进行特异性、敏
【机 构】
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国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室，军事医学科学院野战输血研究所 北京 100850 国家生物
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本研究的目的是建立猪内源性反转录病毒(porcine endogenousretrovirus，PERV)在基因组中整合拷贝数的检测方法。设计并合成了检测PERV pol基因的引物，采用基于SYBR Green I的实时荧光定量PcR方法，检测小型猪基因组DNA中多聚酶基因(pol)的拷贝数，估算出单细胞基因组中PERV整合的拷贝数，从而建立起PERV整合拷贝数的检测方法，并对该方法进行特异性、敏感性、重复性分析。结果表明，该检测方法特异性较高，敏感性高于普通PCR方法。五指山猪与巴马小型猪基因组中均可检测到pol基因的存在，五指山猪单细胞基因组中PERV的拷贝数为1.38±0.33至14.23±3.31之间，巴马小型猪单细胞基因组中PERV的拷贝数为2.96±0.76至58.46±3.50之间。统计学分析表明五指山猪与巴马小型猪单细胞基因组中PERV的拷贝数具有显著性差异，五指山猪基因组中整合的PERV拷贝数较低。五指山猪基因组中PERV的基因序列负荷较低，因此有希望通过选择性育种获得PERV低拷贝猪，在此基础上则易于进一步筛选出无完整PERV前病毒的小型猪个体，也易于通过基因敲除去除PERV，从而为异种移植提供合适供体。此外，基于SYBRGreen Ⅰ的PERV拷贝数的定量PcR检测方法，简便易行，可在短时间内检测大量样品，费用低廉，利于对猪群进行大规模筛选，既可用于实验用猪的病原安全性评价，也可用于异种移植后PERV存在与表达状况的监测。
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本研究在2011年广东某猪场发生严重腹泻疫情的哺乳仔猪中分离到一株猪sapelovi rus，将其命名为YC2 011。应用RT-PcR和RAcE技术，扩增得到该病毒全部基因组序列。该毒株序列全长为7 540个核苷酸[不包括poly(A)尾]，只有一个开放阅读框，编码4个结构蛋白和8个非结构蛋白。YC2 011全基因组与V13和csh代表毒株的核苷酸同源性分别为84.9％和90.2％。
为研究鲁豫冀地区猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)的遗传变异特征，对2006—2011年分离于山东、河南、河北发病猪场的15株PRRSV分离株，分别采用RT-PCR扩增其GP5基因序列并克隆测序，应用DNAStar等软件分析各分离株GP5序列的遗传变异情况。序列比较结果表明，15株分离株之间的氨基酸同源性为85.6—99.5％，有13株与已知变异株的亲缘关系较近，与JXAl株的氨基酸同源性为95.5
从仔猪腹泻粪样中分离出一株能引起Vero细胞病变的病原，通过序列非依赖的单引物扩增法(SISPA)鉴定为呼肠孤病毒。电镜结果显示该病毒直径约为50～80 nm，具有典型的呼肠孤病毒形态学特征。此外，动物回归实验结果显示该病毒可引起哺乳仔猪腹泻。进一步通过对S1基因序列分析表明该病毒为哺乳动物呼肠孤病毒3型，并与之前国内报道的SC—A及HLJ／2007株具有较高的同源性。
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本文详细介绍了高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗病毒含量测定能力比对实施的全过程，比较了参考值评价法和稳健统计技术在本次能力验证结果评价中的应用情况，为进一步有效开展兽用生物制品行业能力比对工作提供了有益的参考。
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