目的建立针对H1、H5亚型流感病毒的多表位重组腺病毒候选疫苗pacAd5-H5HA-EHA-H1HA1new的纯化工艺。方法阴离子介质Source 30Q和分子筛介质Sepharose4FF,建立两步纯化方法,对实验室现有的重组腺病毒进行纯化实验,并对纯化后腺病毒的纯度和滴度进行鉴定。结果运用阴离子Source 30Q层析介质、分子筛Sepharose4FF层析介质两步法对pacAd5-H5HA-EHA-H1HA1new和pacAd5-H5HA2种重组腺病毒分别进行病毒纯化,并对完成纯化的腺病毒进行一一鉴定。经过Source30Q阴离子层析及Sepharose 4FF分子筛层析法,两步层析纯化后的H1、H5亚型流感多表位重组腺病毒pacAd5-H5HA-EHA-H1HA1new总体回收率达到41%。经PCR鉴定后,结果显示H5HA、H1HA1等目的基因片段仍稳定存在,重组腺病毒内的目的基因片段未丢失。结论本研究建立了重组腺病毒疫苗的两步纯化法,经纯化后的重组腺病毒,其目的片段为丢失。