【摘 要】
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利用哺乳动物细胞单杂新技术建立了新的PPARa激动剂高通量药物筛选模型,并进行PPARa激动剂的筛选和活性研究.通过对肝组织的总RNA进行RT-PCR,扩增出PPARa的配体结合域,并将其与含有酵母转录因子GAL4的DNA结合域连接构成杂合的融合表达载体.该表达载体与含有GAL4的结合序列的报告质粒共转染动物细胞,通过测定荧光素酶的活性,评价和筛选PPARa的激动剂.经过模型优化PPARa阳性对照
【机 构】
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河北师范大学生命科学院,石家庄,050016;华北制药集团新药研究开发中心,微生物药物国家工程研究中心,石家庄,050015
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利用哺乳动物细胞单杂新技术建立了新的PPARa激动剂高通量药物筛选模型,并进行PPARa激动剂的筛选和活性研究.通过对肝组织的总RNA进行RT-PCR,扩增出PPARa的配体结合域,并将其与含有酵母转录因子GAL4的DNA结合域连接构成杂合的融合表达载体.该表达载体与含有GAL4的结合序列的报告质粒共转染动物细胞,通过测定荧光素酶的活性,评价和筛选PPARa的激动剂.经过模型优化PPARa阳性对照药fenofibrate和wy14643在该模型上有高的信噪比,最大上调倍增数分别为12和34倍,EC50为6.6μM和4.2μM,该模型有很好的灵敏度和稳定性.利用该模型对本公司的微生物代谢产物库和纯化合物库进行筛选,经过筛选、分离得到多个活性化合物,其中四个新大环内酯化合物Wortmannilactones 对PPARa有较好激动活性, 66 μg/ml浓度可上调6.5倍.从活性菌株中分离得到一活性化合物F03WA472B,经结构确定为Secalonic acid D,其对PPARa的EC50为0.3 μg/ml,其最大激动活性为19.1倍,活性高于目前的降血脂药fenofibrate.而对PPARγ的激动活性在1.4 μM浓度时有21.2倍的上调.Secalonic acid D为新类型的强PPARa/γ双激动剂.
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