目的本实验拟探讨大鼠骨髓来源内皮祖细胞体外培养、诱导扩增和生物学特性鉴定。方法实验于2016-08/2017-06在重庆医科大学附属口腔医院实验室完成。1.实验材料:清洁级健康雄性SD大鼠2只,由重庆医科大学提供,雌雄不拘,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。2.实验方法:应用密度梯度离心法采集大鼠骨髓单个核细胞,差速贴壁法分离内皮祖细胞,重新接种在预先包被1%明胶的培养瓶后,用添加了血管内皮细胞生长因子、人碱性成纤维细胞生长因子、20%胎牛血清及1%双抗的M199培养液诱导骨髓间充质干细胞向内皮祖细胞分化。在倒置相差显微镜下观察内皮祖细胞形态的变化;对贴壁细胞采用双荧光染色法检测内皮祖细胞对FITC-UEA-1及Di I-ac LDL的摄取;Matrigel成小管实验检测内皮祖细胞成小管能力。结果新分离获得的骨髓单个核细胞为小圆形,培养4d后贴壁细胞呈"集落"样生长,中间为圆形贴壁细胞,外周梭形细胞较多,传代后梭形细胞首尾相连,呈"毛细血管样"排列。双荧光染色实验显示阳性,既能摄取Di I-ac LDL又能与FITC-UEA-1结合是EPCs具有的典型内皮特征。Matrigel成小管实验观察到有大量血管样小管形成。结论采用密度梯度离心法可成功从SD大鼠骨髓中分离获得内皮祖细胞,加入M199培养液后能够贴壁增殖,并可以分化为内皮细胞。