【摘 要】
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病毒性传染病是严重危害我国畜禽养殖业的一类重要的传染病,实时荧光定量RT-PCR技术作为一种操作简便、快速高效、特异性强、污染小的诊断方法被广泛应用于病毒性疾病的诊断当中去,在口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、水泡性口炎病毒、冠状病毒、禽流感病毒、马动脉炎病毒、鸭瘟病毒等广泛应用,使病毒性疾病的诊断方法更加丰富,诊断结果从定性到定量质的飞跃.本文介绍了实时荧光定量RT-PCR技术在病毒性疾病诊断
【机 构】
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吉林大学畜牧兽医学院动物重要病原与疫病研究室,吉林,长春,130062
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会暨第六届代表大会
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病毒性传染病是严重危害我国畜禽养殖业的一类重要的传染病,实时荧光定量RT-PCR技术作为一种操作简便、快速高效、特异性强、污染小的诊断方法被广泛应用于病毒性疾病的诊断当中去,在口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、水泡性口炎病毒、冠状病毒、禽流感病毒、马动脉炎病毒、鸭瘟病毒等广泛应用,使病毒性疾病的诊断方法更加丰富,诊断结果从定性到定量质的飞跃.本文介绍了实时荧光定量RT-PCR技术在病毒性疾病诊断中的应用研究进展.
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本文从确诊为附红细胞体感染的猪无菌采集血样,经纯化后抽提猪附红细胞体基因组DNA,跟据已报道的猪附红细胞体16SrRNA基因序列的特点设计了一对特异性引物,进行PCR扩增,结果扩增出了421bp的猪附红细胞体片断,然后对扩增产物进行克隆和测序,所克隆的基因片断与GENBANK中已发表的序列同源生只有74.8％,但经分析仍确认为是猪附红细胞体的16SrRNA的部分序列(该序列已被GENBANK收录,
本文根据温氏附红细胞体16SrRNA基因序列(Genbank登陆号为AY946266),设计一对种特异性引物,建立了温氏附红细胞体的PCR诊断方法.特异性试验和敏感性试验表明,此诊断方法与猪附红细胞体、东方巴贝斯虫、牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、边缘边虫、弓形虫无交叉反应,能检测温氏附红细胞体最低DNA量为1.78fg.用此PCR方法检测湖北某实验动物场黄牛阳性率为53.8％、湖北某奶牛场奶牛阳性率为
本文应用光镜和电镜对猪附红细胞体显微结构和超微结构进行观察.结果显示:附红细胞体属典型的原核生物,多数为大小不等的球形、卵圆形、杆状等多形态生物体,直径为0.2μm～2.5μm,常在红细胞表面或血浆中单个或成团寄生.该病原无细胞壁,由单层界膜包裹着,无明显细胞器和细胞核.附红细胞体通过一些细丝连接到红细胞膜上,使红细胞膜表面出现皱褶、突起、凹陷,导致红细胞结构和功能改变.
本文应用RT_PCR技术对2002～2005年间收集于河南省15个地区具有代表性的39株IBDV的VP2基因进行了克隆和序列分析.结果发现,有30株地方流行株属于IBDV超强毒株,但各毒株间也有一定的差异;有9个分离株,既不符合超强毒的特征,也不完全符合弱毒株的特征,是基因已经发生变异的弱毒株.同一鸡群再次发病是由同一毒株引起,但基因已经发生了一定的变化.在系统发育进化树上,分离于各地区的IBDV
本文应用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)接种、琼脂扩散试验、电镜观察,从临床病鸡的法氏囊组织分别分离到3株传染性法氏囊病病毒(IBDV)CH03、JG04和QJ04株,对4周龄未免疫鸡的攻毒致死率分别为92％、83％、67％,对鸡胚的半数致死量(ELD50)分别为10-6.8/0.2ml、10-5.4/0.2ml、10-4.6/0.2ml;应用逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增的IBDVVP2基
本文通过将鹅源副粘病毒NA-1株毒种接种于11日龄SPF鸡胚,收集36～72h死亡的鸡胚尿囊液,提取并分离鹅源副粘病毒(NA-1株).参考已发表的鹅源副粘病毒Ⅰ型M基因序列,设计并合成了一对特异性引物,预期扩增的M基因包含完整的开放阅读框.通过RT-PCR扩增出鹅源副粘病毒Ⅰ型NA-1株M基因,琼脂糖凝胶电泳,回收纯化,得到M基因(经EcoRⅠ,XbaⅠ消化).将M基因克隆进入pCI-neo载体(
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