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目的 本研究旨在建立一种牛γ干扰素ELISPOT检测方法，并评价该方法用于牛结核病检测的价值。方法 通过筛选与天然牛γ干扰素特异性结合的单克隆抗体分别作为包被抗体和检测抗体，并探索不同的实验条件确定最佳包被抗体浓度、最佳细胞浓度和最佳检测抗体浓度等，建立牛γ干扰素ELISPOT检测方法。采集30头奶牛尾静脉血并分离外周血单个核细胞，以结核菌素作为刺激原，使用建立的ELISPOT检测方法进行牛结核病检测，并与BOVIGAMTM ELISA试剂盒检测结果进行比较。