【摘 要】
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为了提高表达含有PRRSV GP5基因DNA疫苗的免疫效应,本研究通过人工合成的方法将GP5基因的密码子改造为猪体嗜好的密码子,并将其作为免疫原基因,连同野生型GP5基因,分别插入带
【机 构】
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中国农科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001
【出 处】
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第三次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会
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为了提高表达含有PRRSV GP5基因DNA疫苗的免疫效应,本研究通过人工合成的方法将GP5基因的密码子改造为猪体嗜好的密码子,并将其作为免疫原基因,连同野生型GP5基因,分别插入带有CMV启动子的表达载体pIRES1neo中,构建重组质粒plR-optiGP5和pIR-GP5。将这两种质粒分别转染293T_细胞,转染后48h,采用间接免疫荧光和Western blot方法检测GP5基因的体外表达情况,结果两种检测方法显示重组质粒pIR-optiGP5的蛋白表达量明显多于pIR-GP5。为了评价DNA免疫质粒pIR-optiGP5的免疫效果,选取30只6～8周龄雌性BALB/c小鼠,随机分为三组,每组10只,将pIRES1neo、pIR-GP5、pIR-optiGP5分别以100,μg/只剂量,进行肌肉多点注射,共免疫三次,每次间隔2周,同时利用间接免疫荧光技术、流式细胞技术、淋巴细胞特异性增殖试验等方法检测其体液免疫和细胞免疫水平。结果显示:DNA免疫质粒pIR-optiGP5在二免后即可检测到荧光抗体,而pIR-GP5在三免后才能检测到;同时发现用pIR-optiGP5质粒免疫小鼠的CD4<+>、CD8<+>T淋巴细胞百分数及特异性刺激指数均高于pIR-GP5免疫小鼠。推测经过密码子优化的GP5基因其蛋白在小鼠体内得到了较高水平的表达,并诱导了较强的免疫应答,这为进一步研究和设计有效的PRRSV DNA疫苗提供了新的思路。
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