【摘 要】
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肠激酶(EK)是哺乳动物十二指肠中的一种丝氨酸蛋白酶,可特异识别并酶解专一性的氨基酸序列Asp-Asp-Asp-Asp-Lys,并沿序列羧基端切下.在基因工程目标蛋白表达纯化策略中,许多
【机 构】
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天津大学化工学院生物工程系天津300072
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肠激酶(EK)是哺乳动物十二指肠中的一种丝氨酸蛋白酶,可特异识别并酶解专一性的氨基酸序列Asp-Asp-Asp-Asp-Lys,并沿序列羧基端切下.在基因工程目标蛋白表达纯化策略中,许多原核表达载体可以使目标蛋白序列紧接肠激酶识别的氨基酸序列之后,与标签蛋白一起进行融合(标签蛋白-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-目标蛋白)表达.继而,利用标签蛋白的特点对表达的融合蛋白进行分离纯化,利用肠激酶的特点将纯化的融合蛋白进行切割,切出的目标蛋白首位氨基酸同天然蛋白完全相同.因此,EK是基因工程目标蛋白融合表达中的首选工具酶之一.本实验利用大肠杆菌E.coli JM109，载体pUCm-T，pET32a/EKL，酵母细胞GS115及酵母表达载体pPIC9，将肠激酶的轻链基因转到毕赤酵母细胞中，进行发酵从而生产出肠激酶蛋白.
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