【摘 要】
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目的 通过建立A型流感病毒感染肺巨噬细胞模型,研究流感病毒(H1N1型)感染小鼠肺巨噬细胞(RAW264.7)不同时间后自噬的活性变化以及五倍子处理后对自噬的影响.方法 ①用流感病毒感染体外感染小鼠肺巨噬细胞,以荧光定量RT-PCR法鉴定细胞模型建立成功,检测相同病毒浓度不同染毒时间、相同染毒时间不同病毒浓度感染细胞后自噬小体的积累和LC3的型别转化程度.②分选病毒最佳感染时间及病毒浓度,设空白组
【机 构】
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湖南中医药大学 湖南长沙 410208
【出 处】
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世界中医药学会联合会中医药抗病毒研究专业委员会第一届学术年会
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目的 通过建立A型流感病毒感染肺巨噬细胞模型,研究流感病毒(H1N1型)感染小鼠肺巨噬细胞(RAW264.7)不同时间后自噬的活性变化以及五倍子处理后对自噬的影响.方法 ①用流感病毒感染体外感染小鼠肺巨噬细胞,以荧光定量RT-PCR法鉴定细胞模型建立成功,检测相同病毒浓度不同染毒时间、相同染毒时间不同病毒浓度感染细胞后自噬小体的积累和LC3的型别转化程度.②分选病毒最佳感染时间及病毒浓度,设空白组、正常组、模型组、五倍子组、奥司他韦组,感染组以100 TCID50 2.75,感染6h、12h、24h、36h后分别对应给药10ul.24及48小时后用MTT法检测细胞存活率；用Western Blotting检测自噬相关蛋白LC3的表达情况.结果 ①激光共聚焦显微镜观察显示,与阳性组相比,模型组流感病毒感染细胞后在各个时间段均可以在细胞核周围观察到自噬小体,其中感染24h自噬小体积累最为显著.②Western Blotting结果显示,与模型组相比,五倍子组、奥司他韦组分别干预染毒细胞后LC3-Ⅱ的水平均降低后能降低染毒细胞中胞浆中的蛋白的型别转换程度,其中以五倍子干预效果最优.结论 A型流感病毒感染后能诱导小鼠肺巨噬细胞发生自噬,五倍子干预处理后LC3-Ⅱ水平降低,表明五倍子可能会通过某种机制调节自噬使自噬维持在较低水平,从而减少病毒感染对细胞造成的损伤.
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