联合使用膜结合法和聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳分析口腔细菌间的粘附作用

来源 :全国第八次牙体牙髓病学学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:iezhan
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  目的:研究不同种属口腔细菌间的相互粘附作用对于了解口腔微生物群落的种属间作用十分重要.目前关于该课题的认知主要基于已知的可培养细菌的配对共凝集实验.本研究联合使用膜结合法和聚合酶链式反应一变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)系统性研究口腔细菌的相互粘附谱.材料和方法:以两种口腔细菌作为"基础菌":已知能与多数口腔细菌粘附的具核梭杆菌以及粘附对象研究尚不多的变异链球菌."基础菌"固定于硝酸纤维膜,漂洗封闭后加入混合菌悬液(包括已知细菌或天然唾液细菌),共同孵育后洗去未结合细菌,最后用0.2mol/L甘氨酸洗脱结合细菌,提取基因组DNA,针对16srRNA进行PCR扩增,DGGE分离PCR产物.对条带进行选择性切胶回收,测序后通过不同数据库的核酸BLAST检索进行鉴定.结果:能与变异链球菌粘附的细菌种属较少,而具核梭杆菌则能与众多种属的细菌粘附,包括一些之前被认为不可培养的细菌.结论:本实验所采用的方法能更有效地分析口腔细菌的相互粘附谱,能促进口腔微生物种属间粘附的研究.
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