【摘 要】
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目的：本课题通过采用蛋白质组学的方法对粪肠球菌ATCC 19433进行分析,以获得其蛋白质组信息.方法：样品制备：粪肠球菌ATCC19433菌株在PYG培养基中于37℃恒温培养箱中震摇培养
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目的：本课题通过采用蛋白质组学的方法对粪肠球菌ATCC 19433进行分析,以获得其蛋白质组信息.方法：样品制备：粪肠球菌ATCC19433菌株在PYG培养基中于37℃恒温培养箱中震摇培养24小时.收集细菌加入2％SDS和蛋白酶抑制剂,裂解细菌得到的样品.而后估算蛋白含量. SDS-PAGE：Tris-甘氨酸SDS-PAGE层积胶浓度5％,分离胶浓度10％.电泳采用恒定电流：层积胶恒定电流10mA,分离胶电流30mA.电泳结束后,用考马斯亮蓝染液染色凝胶.蛋白的酶解：不同条带切为连续的胶条.把胶条处理为约胶粒并标记分装后,以1/1比例配置100％乙腈(CH3CN)20mM与20mM碳酸氢胺(NH4HCO3)脱色液,去除染色.而后在样品加入100％乙腈干燥胶粒.完成后在胶粒中加入胰酶溶液于37℃中酶解,之后提取含有肽段的上清液保留.再加入提肽液(3ml CH3CN,15μI三氟乙酸,3ml去离子水)提取含有肽段的上清液.最终,将上清在负压干燥机中37℃干燥.将提取的样品进行ESI-TOF-MS质谱检测.数据处理：质谱所得到的蛋白数ix science工具下进行蛋白序列的鉴别.蛋白质的鉴定,使用Swiss Proto数据库完成.结果：质谱检测后的数据通过与蛋白序列数据库进行比较,共发现了1 09种蛋白序列.其中,粪肠球菌的蛋白序列共有40种.这里包括有粪肠球菌的多种结构蛋白、代谢酶、蛋白合成过程中的分子和部分信号分子.发现的其他细菌的蛋白成分则多为相似的蛋白序列.结论：本次研究中,采用蛋白质组学的方法对粪肠球菌ATCC 19433的蛋白组进行了鉴定和分析.所得的结果鉴定出了粪肠球菌的多种的细菌的结构蛋白、酶类和信号分子.部分了解了粪肠球菌ATCC 19433的蛋白组的规模和组成,为今后的更深入探讨打下了基础.
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