【摘 要】
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由草鱼呼肠孤病毒(,GCRV)引起的草鱼出血病给我国的草鱼养殖业造成了巨大的经济损失,早期诊断是防控草鱼出血病的关键。本研究基于NASBA及ELISA 试验建立了一种分子水平上快速检测GCRV的方法。根据Ⅱ型GCRV的S6 节段基因保守区域设计一对扩增引物及相应的捕获探针和检测探针,对NASBA 反应体系中的K+离子浓度、引物浓度、RnaseH 和T7 RNA polymerase 酶用量进行优化
【机 构】
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中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业部渔药创制重点实验室,广东省水生动物免疫重点实验室,广东广州 510380
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由草鱼呼肠孤病毒(,GCRV)引起的草鱼出血病给我国的草鱼养殖业造成了巨大的经济损失,早期诊断是防控草鱼出血病的关键。本研究基于NASBA及ELISA 试验建立了一种分子水平上快速检测GCRV的方法。根据Ⅱ型GCRV的S6 节段基因保守区域设计一对扩增引物及相应的捕获探针和检测探针,对NASBA 反应体系中的K+离子浓度、引物浓度、RnaseH 和T7 RNA polymerase 酶用量进行优化,然后采用ELISA 方法检测NASBA扩增产物,建立了NASBA-ELISA方法,最后评价NASBA-ELISA方法的特异性、敏感性、重复性及对临床样品检测的可靠性。结果 表明,本研究建立的NASBA-ELISA方法,可以在5 个小时内检测出只有14 拷贝/μL 病毒含量的样本,对临床样品的诊断灵敏度和诊断特异性均为100#,具有很好的特异性,对其它非特异性核酸模板没有交叉反应。因此,本研究建立的NASBA-ELISA 是一种快速、高效和敏感的病原检测方法,可用于草鱼养殖生产中GCRV 病毒的快速检测。
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