【摘 要】
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目的:建立eNOS基因敲除大鼠模型.
方法:利用锌指酶技术,通过显微注射的方法将RNA注入SD大鼠受精卵并移植到同期受孕的SD受体母鼠输卵管内.出生后仔鼠用PCR产物测序的方法
【机 构】
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中国医科大学实验动物部110001南京徇齐生物技术有限公司210061
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目的:建立eNOS基因敲除大鼠模型.
方法:利用锌指酶技术,通过显微注射的方法将RNA注入SD大鼠受精卵并移植到同期受孕的SD受体母鼠输卵管内.出生后仔鼠用PCR产物测序的方法鉴定基因型.对敲除大鼠进行外观观察,HE染色分析组织结构形态.通过Western-blot分析敲除大鼠模型的心脏和肾脏组织中eNOS的表达情况.测量8-16周大鼠体重,分析eNOS基因敲除对体重的影响.采用尾套法测量大鼠心率、血压、收缩压和舒张压,比较与野生型大鼠的差异.
结果:通过显微注射方法共注441枚受精卵,存活365枚,分别移入12只SD大鼠输卵管,共产出23只F0代大鼠.PCR产物测序分析获得4只阳性原代大鼠,对8号大鼠筛选获得纯合子.阳性纯合子大鼠表现为肢体缺损,HE染色动脉血管结构形态异常.Western-blot结果显示,eNOS敲除大鼠的心脏和肾脏组织中不表达eNOS基因.敲除大鼠的体重明显低于野生型大鼠,体重增长幅度慢.血压、收缩压、舒张压均高于野生型SD大鼠,有极显著差异(P＜0.01).eNOS敲除雌鼠心率低于野生型SD雌鼠,有显著差异(P＜0.05).eNOS敲除雄鼠心率与野生型SD雄鼠相比无差异.
结论:成功建立eNOS基因敲除大鼠模型,该模型是高血压疾病研究理想的动物模型.
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