胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells,ES细胞)是一种多潜能(Pluripotent)细胞,在体外具有自我更新(Self-renewal)并向机体各组织细胞定向分化能力。ES细胞在研究胚胎发育,治疗性克隆及转基因动物上的应用使其成为生命科学研究的热点。本文诣在探索ES细胞饲养层的优化处理以及囊胚的获得时间对内细胞团(Inner Cell Mass,ICM)贴壁率的影响。结果表明:原代小鼠成纤维(Mouse EmbryonicFibroblast,MEF)中杂细胞较多,不适宜作为饲养层使用。第二、三代MEF不但细胞较纯,而且生长最旺盛,是作为饲养层的最佳选择,也可使用冻存半年内的MEF细胞作为饲养层。在处理MEF过程中,丝裂霉素C浓度为10-15ug/ml处理3小时能有效支持ES细胞的生长、增殖。并且应该选取丝裂霉素C处理后一周内的MEF作为饲养层,在ES细胞培养过程中及时更换新的饲养层。4d冲出的胚胎基本为囊胚,3.5d冲出的大部分为桑葚胚,尽管在体外也不断发育,但桑椹胚在贴壁后往往发育缓慢甚至不发育、易退化。4d胚龄的胚胎中囊胚率显著高相对于3.5d胚龄的,ICM的出现率和贴壁率也显著高于3.5d的。因此4d胚龄的胚胎更适用于ES细胞的提取,分离和传代。通过形态鉴定、AP染色和OCT-4免疫荧光对ES细胞进行初步检测,证明所提取的ICM是具有多能性的ES细胞。