论文部分内容阅读
本研究的目的是建立猪内源性反转录病毒(porcine endogenousretrovirus，PERV)在基因组中整合拷贝数的检测方法。设计并合成了检测PERV pol基因的引物，采用基于SYBR Green I的实时荧光定量PcR方法，检测小型猪基因组DNA中多聚酶基因(pol)的拷贝数，估算出单细胞基因组中PERV整合的拷贝数，从而建立起PERV整合拷贝数的检测方法，并对该方法进行特异性、敏感性、重复性分析。结果表明，该检测方法特异性较高，敏感性高于普通PCR方法。五指山猪与巴马小型猪基因组中均可检测到pol基因的存在，五指山猪单细胞基因组中PERV的拷贝数为1.38±0.33至14.23±3.31之间，巴马小型猪单细胞基因组中PERV的拷贝数为2.96±0.76至58.46±3.50之间。统计学分析表明五指山猪与巴马小型猪单细胞基因组中PERV的拷贝数具有显著性差异，五指山猪基因组中整合的PERV拷贝数较低。五指山猪基因组中PERV的基因序列负荷较低，因此有希望通过选择性育种获得PERV低拷贝猪，在此基础上则易于进一步筛选出无完整PERV前病毒的小型猪个体，也易于通过基因敲除去除PERV，从而为异种移植提供合适供体。此外，基于SYBRGreen Ⅰ的PERV拷贝数的定量PcR检测方法，简便易行，可在短时间内检测大量样品，费用低廉，利于对猪群进行大规模筛选，既可用于实验用猪的病原安全性评价，也可用于异种移植后PERV存在与表达状况的监测。