论文部分内容阅读
目的：肺腺癌(lung adenocarcinoma,ADC)是原发性肺癌中最常见的病理类型,约占肺癌总发病人数的30％,五年生存率约17％.在最新的WHO分类中,定义了腺癌的一种特殊的亚型——细支气管肺泡细胞癌(bronchioloalveolar carcinoma,BAC),具有非侵袭性的特征以及良好的预后.BAC呈非侵袭性鳞片状生长模式,没有间质、淋巴管、血管及胸膜的侵袭.然而,部分归于混合型的侵袭性ADC可能亦含有不同程度的BAC成分.临床上,此种混合型侵袭性ADC(AWBF)远远多于单纯BAC.越来越多的文献表明,肺腺癌的发生发展是一个多因素作用、多基因参与的多步骤有序的复杂过程,从不典型腺瘤样增生(adenomatous hyperplasia,AAH)发展到BAC,最终演变为AWBF.研究发现,BAC及伴有局部微侵袭的BAC预后良好,五年生存率接近100％,而肿瘤合并腺的成分后,五年生存率明显下降,预后不良.因此,本课题旨在通过蛋白质组学的技术方法寻找BAC与AWBF之间的差异蛋白,为建立肺腺癌的分子病理学分型,判断肿瘤的恶变潜能,探讨腺癌的发病机制、寻找肿瘤预后特异标记物或新的治疗靶点提供理论依据.方法：提取BAC及AWBF组织的总蛋白,应用双向凝胶电泳技术(2-DE)分离获得二者高质量的蛋白表达图谱,经Imagemaster及PD-QUEST软件比较分析,筛选二者间的差异蛋白点并予质谱鉴定.以Western blot技术检测BAC与AWBF组织内mre11蛋白的表达情况.对BAC与AWBF石蜡标本行免疫组化染色检测mre11蛋白的表达.结果：获得了分辨率高、重复性好的BAC与AWBF的双向电泳图谱.软件分析获得差异大于2倍以上的蛋白质点共有37个,其中21个在AWBF中上调,16个下调.经质谱鉴定了10种蛋白,鉴定的蛋白涉及VDAC2、SerpinA1、mre11、Annexin2、PGK1、PDIA3等.鉴于mre11在肿瘤中的研究相对较少,由此考虑mre11可能为研究腺癌的发病机制提供新的线索.故应用Western blot及免疫组化染色的方法对其进一步验证,结果提示,相比于BAC,mre11在AWBF中的表达水平显著增强.免疫组化染色结果显示,BAC内mre11抗原的阳性表达率为(30.65％±12.84％),显著低于AWBF组(60.85％±10.18％) (P＜0.01).结论：应用双向凝胶电泳技术整体展示了BAC及AWBF的蛋白表达谱,BAC与AWBF的蛋白表达图谱相近,仅表现为蛋白表达水平量的改变,无"全或无"式质的改变.2、筛选鉴定出包括VDAC2、SerpinA1、mre11、Annexin2等10个差异蛋白,推测它们可能与早期肺腺癌的恶性进展相关.3、与BAC相比,mre11在AWBF中表达明显上调,其在肺腺癌中的作用有待于进一步的研究,有望成为肺腺癌诊疗的新靶点.