【摘 要】
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结核分枝杆菌蛋白质O-甘露糖基化与其在体外和体内的增殖及致病性有关.在分枝杆菌中,蛋白质O-甘露糖基化过程包括糖基化的起始和糖链的延长.起始过程是由聚戊烯醇-磷酸-甘露糖-蛋白质-甘露糖基转移酶(polyprenol-phosphate-mannose-protein mannosyl-transferase,PMT)将甘露糖基供体聚戊烯醇-磷酸-甘露糖(polyprenol-phosphate-
【机 构】
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大连医科大学生物化学教研室 大连医科大学生物化学教研室;大连医科大学微生物学教研室
【出 处】
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2015中国酶工程与糖生物工程学术研讨会
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结核分枝杆菌蛋白质O-甘露糖基化与其在体外和体内的增殖及致病性有关.在分枝杆菌中,蛋白质O-甘露糖基化过程包括糖基化的起始和糖链的延长.起始过程是由聚戊烯醇-磷酸-甘露糖-蛋白质-甘露糖基转移酶(polyprenol-phosphate-mannose-protein mannosyl-transferase,PMT)将甘露糖基供体聚戊烯醇-磷酸-甘露糖(polyprenol-phosphate-mannose,PPM)的甘露糖基转移到蛋白质多肽链中Ser或Thr的羟基上.延长过程是由甘露糖基转移酶(mannosyltransferases)催化甘露糖基供体GDP-甘露糖(GDP-mannose)的甘露糖通过α(1,2)糖苷键连接到已有的甘露糖上.GDP-mannose的生物合成途径包括三步反应,磷酸甘露糖异构酶催化果糖-6-磷酸转变为甘露糖-6-磷酸,磷酸甘露糖变位酶催化甘露糖-6-磷酸转变为甘露糖-1-磷酸,GDP-甘露糖焦磷酸化酶催化GDP-mannose的生成.PPM合酶催化GDP-mannose和聚戊烯醇(polyprenol)形成PPM.结核分枝杆菌(M.tuberculosis) Rv1002c基因编码PMT,且为细菌生长必需基因.在模式菌耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)中,MSMEG_ 5447为Rv1002c的同源基因.在本研究中,我们构建了MSMEG_ 5447基因敲除菌株(ΔM5447),并确定MSMEG_ 5447为细菌生长的非必需基因.我们将结核分枝杆菌Rv1096基因转入ΔM5447菌株后,发现Rv1096蛋白不发生O-甘露糖基化.将分枝杆菌绿色荧光蛋白GFP表达载体pCG76-hsp60-gfp电转化到不同耻垢分枝杆菌菌株中, 获得Msm/gfp、Msm/Rv1096/gfp、ΔM5447/gfp和ΔM5447/Rv1096/gfp菌株.用不同菌株分别感染小鼠巨噬细胞系RAW246.7,用Lyso-Tracker Red对溶酶体染色并用激光共聚焦显微镜进行观察,发现Msrn/gfp及Msm/Rv 1096/gfp组的菌体完整,菌体呈绿色杆状,而ΔM5447/gfp及ΔM5447/Rv1096/gfp组的菌体被消化,菌体呈绿色弥散状.结果表明O-甘露糖基化缺失菌株更容易被巨噬细胞溶酶体消化.我们将用不同菌株分别感染小鼠,进一步研究Rv1096蛋白的甘露糖链在致病中的作用.
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