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目的 急性心肌梗塞(acute myocardial infraction,AMI)是严重威胁人类健康的疾病.由于发病率和死亡率很高,一直受到人们的密切关注.对于一些典型的AMI患者,其临床诊断并不困难,但对于一些不典型的AMI患者,如不出现胸痛,心电图也不出现典型的Q波,这就给及时诊断造成一定的难度.因此,多年来筛选和寻找早期、特异、灵敏的心肌损伤标志物以及简便、快捷的检测分析方法一直是人们研究探索的热点.cTnⅠ对于心肌损伤和急性心肌梗塞具有重要的诊断价值.cTnⅠ作为心肌损伤标志物以其高度的器官特异性,对心肌损伤的高度敏感性及较长的诊断窗口期,目前已成为国内外研究的热点和焦点,正逐步取代CK-MB、LDH等心肌酶学指标,成为判断心肌损伤,特别是诊断心肌梗死的"金标准".目前国内临床上检测cTnI所使用的试剂盒多为进口或进口原料国内组装,致使价格昂贵,既增加了测试成本和患者的经济负担,也限制了这一特异、灵敏的心肌损伤标志物的普及.此外,采用传统的方法从心肌组织中提纯cTnⅠ过程复杂,产率极低.同时,心肌组织的来源及质量也难以保证.鉴于此,本研究根据人cTnⅠ氨基酸序列,结合计算机软件分析,采用固相多肽合成法,合成了cTnⅠ分子98-110位氨基酸肽段序列(RQLHARVDKVDEE),经与载体蛋白KLH偶联作为免疫原,免疫家兔制备相应抗体.为以国产试剂代替进口试剂,开发出具有自主知识产权的,完全国产化的cTnⅠ检测试剂盒奠定基础.方法 根据计算机软件分析,预测cTnI分子的亲水性、抗原性和同源性.选择cTnI分子中第98-110位氨基酸肽段序列(RQLHARVDKVDEE)作为抗原肽,应用全自动多肽合成仪,采用固相合成法合成了该肽段,经HPLC进行了纯化并做了质谱鉴定.为增强该肽段的免疫原性,采用MBS双功能试剂将合成肽与载体蛋白(KLH)进行了偶联.以此连接物作为免疫原,背部皮内多点注射免疫家兔.经初次免疫和多次加强免疫,应用间接ELISA法检测抗血清效价,颈动脉取血,收集抗血清,并对抗血清进行了效价、亲和常数和特异性鉴定.结果 实验结果表明,采用多肽合成法合成的cTnI分子中第98-110位氨基酸肽段序列(13肽),经HPLC检测,其纯度达95％；质谱鉴定结果也表明,达到了预期的结果；免疫学实验证实,该肽段具有较强的免疫原性.用此肽段与KLH的连接物作为免疫原制备的抗体,经间接ELISA法检测,其效价达1：20万；该抗体与从心肌组织中提取的cTnI也具有较好的交叉反应性；用Scatchard作图法,求得其亲和常数为0.98×109L/mol；与cTnT,CK-MB均无交叉反应.上述结果充分表明,我们选择的该肽段(RQLHARVDKVDEE)免疫原性好,并用其制备出了高效价、高亲和力和高特异性的抗体,可以满足后续实验的要求.结论 cTnⅠ合成肽及其相应抗体的研制为cTnⅠ检测试剂的国产化,进而研制出具有自主知识产权,完全国产化的cTnⅠ临床检测试剂盒奠定了坚实的基础.