【摘 要】
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目的：建立HBV体外感染HepG2细胞的实验方法。方法：培养HepG2细胞传至6孔板中，以3毫升含10％新生牛血清的DMEM培养基，在37℃，5％CO2条件下的孵箱中培养。24h后进行HBV体外感染HepG2的实验．感染组用HBV阳性血清(HBV DNA 3×109copy/ml，用DMEM按1：3稀释，滤过后使用)0.5m1，阴性对照组用HBV阴性血清．实验开始后HepG2细胞继续孵育24h，而
【机 构】
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第四军医大学预防医学系 流行病学教研室,陕西 西安 710032
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目的：建立HBV体外感染HepG2细胞的实验方法。
方法：培养HepG2细胞传至6孔板中，以3毫升含10％新生牛血清的DMEM培养基，在37℃，5％CO2条件下的孵箱中培养。24h后进行HBV体外感染HepG2的实验．感染组用HBV阳性血清(HBV DNA 3×109copy/ml，用DMEM按1：3稀释，滤过后使用)0.5m1，阴性对照组用HBV阴性血清．实验开始后HepG2细胞继续孵育24h，而后用0.01M PBS彻底清洗各细胞培养孔涤完毕后各孔加入舍2％新生牛血清的DMEM培养液。PBS洗后每隔12h收集各孔细胞培养上清一次．ELISA检测细胞培养上清中的HBsAg．PCR检测细胞培养上清和HepG2细胞中的HBVDNA，用荧光定量PCR检测感染组细胞上清中HBV DNA的含量．
结果：HBV阳性血清感染组，在PBS洗后12h的细胞培养上清中ELISA可检测到HBsAg阳性持续到84h．HBV阳性血清感染组细胞培养上清和HcpG2细胞中HBV DNA PCR阳性，阴性对照组和空白对照组HBV DNA PCR阴性．荧光定量PCR检测，感染组洗后的HBV定量为阴性，而在PBS洗后36小时、84小时的上清中HBV的量达到5×105和3×106(copy/ml).
结论：HBV阳性血清进行HBV感染体外培养的HepG2细胞是可行的．
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