【摘 要】
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将A／Tiger／Harbin/132／2007(HSN1)的NP基因克隆入pVAX1载体中，然后将含有NP基因的表达盒(CMV+NP+P0lyA)克隆入pVAXE3的Ssp I酶切缺失处，获得含有NP表达盒的穿梭载体pVAXAE3-NP
【机 构】
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四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室 四川，雅安 625014 军事医学科学院军事兽医研究所 吉林，长春 130062
【出 处】
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四川省畜牧兽医学会2010年学术年会
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将A／Tiger／Harbin/132／2007(HSN1)的NP基因克隆入pVAX1载体中，然后将含有NP基因的表达盒(CMV+NP+P0lyA)克隆入pVAXE3的Ssp I酶切缺失处，获得含有NP表达盒的穿梭载体pVAXAE3-NP。用Sal I+Nru 1分别对pVAXAE3-NP和pPoly-2-CAV2进行双酶切，将含有NP表达盒的片段定向克隆入pPoly2-CAV2，获得在E3区缺失处插入NP表达盒的重组质粒pCAV-2-NP。释 CAV-2-NP重组基因组，脂质体介导转染DK细胞，获得了能使DK细胞产生典型的腺病毒样细胞病变的CAV-2-NP重组病毒。从形态学、基因组水平、NP基因的转录、NP蛋白的表达以及重组病毒的生长特征等方面进行了鉴定。结果表明，CAV-2-NP具有典型的CAV-2形态特征，CAV-2-NP在繁殖的过程中没有对H5N1 NP表达盒片段进行缺失或重排。并且能够转录H5N1NP的mRNA，ELISA和免疫荧光分析表明重组表达产物可被流感病毒NP单克隆抗体1G6G4所识别。
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