布鲁氏菌(Brucella)是布鲁氏菌病(简称布病)的病原体，能感染多种动物引起动物布鲁氏菌病，也可以通过多种途径感染人，是典型的人兽共患病。根据国家标准规定，我国主要采用病原学和血清学方法对布鲁氏菌病进行诊断，但这些传统方法存在着检测时间长、操作步骤繁琐、假阳性和假阴性率较高、并对实验人员的健康安全构成一定的威胁。随着分子生物学技术的发展，基因诊断在临床中的应用变的日趋广泛。本研究根据布鲁氏菌不同种型DNA的多态性，将布鲁氏菌属、种、B1牛种I型的PCR鉴定方法与单链构象多态分析(SSCP)相结合，建立了布鲁氏菌病的鉴别诊断的PCR法。本研究以布鲁氏菌致病力因子-四型分泌系统中的VirB8基因为模板，设计引物，建立了诊断布鲁氏菌属的VirB8-PCR方法。根据布鲁氏菌IS711插入序列及相邻但染色体DNA种的不同而设计引物，建立AMOS-PCR法用于布鲁氏菌种和部分型的鉴别。建立B1-PCR方法鉴别牛种I型菌，并对其Ery基因扩增，建立并应用PCR—SSCP方法区分A19疫苗株与其他牛种布鲁氏菌，进一步对家畜的自然感染与主动免疫进行诊断区分。为提高PCR法检测的可靠性，本研究建立了以布鲁氏菌VirB8缺失株作为内参株的IR-PCR法，该方法有效地避免检测过程中人为操作错误，降低了假阴性结果的出现，提高了PCR法鉴定布鲁氏菌方法的准确度与可靠性。