婴幼儿血管瘤中血管周围祖细胞的分离培养及其体外和体内分化实验

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背景:婴幼儿血管瘤是儿童常见的良性肿瘤,在1岁之内增长较快,1岁之后逐渐消退并被纤维脂肪组织代替。近期研究报道多种器官中的间充质干细胞来源于血管周围祖细胞(Perivascular progenitor cells,PPCs)。我们假设血管瘤组织中的PPCs具有间充质干细胞的特征,与血管瘤消退期脂肪形成过程有关。方法:我们应用荧光激活细胞分选仪从增生期和消退期血管瘤中分离PDGFR-β(+)PPCs(Hemangioma-derivedPPCs,Hem-PPCs)。并分离人骨髓来源的间充质干细胞(hBM-MSCs)和儿童包皮中的成纤维细胞作为对照。流式细胞仪和免疫荧光染色检测Hem-PPCs的抗原标记。体外诱导分化实验验证Hem-PPCs的多能性。RT-PCR检测相关基因表达。并将Hem-PPCs与Matrigel混合后注射到裸鼠皮下以观察它们的体内分化结果。结果 Hem-PPCs为成纤维细胞样,表达间充质干细胞的标记抗原CD105、CD90、CD29、Vimentin,也表达周细胞标记抗原α-SMA和PDGFR-β,不表达造血干细胞/内皮细胞标记抗原CD45、CD34、CD31和flt-1。体外实验证实Hem-PPCs具有多向分化潜能,尤其是很强的脂肪分化潜能。在裸鼠体内,Hem-PPCs能分化为脂肪细胞。而作为对照的hBM-MSCs和成纤维细胞只能分化为成纤维细胞。抗人细胞核抗原染色和GFP标记证实移植块中的脂肪细胞和成纤维细胞来自我们注射的细胞,而不是宿主细胞。结论:我们从血管瘤中分离PPCs在体外具有多能性,在体内分化为脂肪细胞。研究结果证实PPCs是血管瘤消退期脂肪形成的细胞基础。
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