ORF2基因缺失的PCV2的构建与部分生物学特性研究

来源 :第五届中国畜牧科技论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:c0128
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  本研究设计了一对特异性引物,从疑似PMWS(断乳仔猪多系统衰竭综合症)的病料中经PCR直接扩增出PCV2全基因组,再与载体pMDl8-T Simple连接后形成重组质粒pMDl8-T Simple-PCV2(命名为P-S-PCV2)。用ORF2特异的限制性内切酶EcoR I对P-S-PCV2进行酶切、补平连接反应,构建了ORF2基因缺失突变的重组质粒(命名为P-S-PCV2-B)。用SacⅡ酶对基因缺失突变的重组质粒进行酶切,获得的线性化的基因突变PCV2基因组在体外进行自身环化,形成了相应的基因缺失病毒粒子(命名为PCV2-B)。用PCV2-B缺失突变株进行了细胞转染、动物致病性和免疫原性、T淋巴细胞亚群的动态变化等部分生物学特性的研究,结果显示:PCV2-B转染mRS-2细胞后,电镜观察可见病毒颗粒,PCR-RFLP检测有突变株生长。PCV2-B接种仔猪后无临床典型大体病变,PCR-RFLP检测淋巴结中有PCV-B突变病毒的感染。PCV2-B免疫仔猪后抗体没有升高;CD3+和CD4+整体水平下降,第2周与对照组差异显著;CD8+与对照组差异不显著。结果说明ORF2基因缺失突变的PCV2仍具有复制感染能力,免疫原性减弱,细胞免疫被部分激活。
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